ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΩΝ ΜΕ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΘΕΡΜΙΚΟΥ ΣΟΚ

Abstract

Η ΤΕΤΑΡΤΟΤΑΓΗΣ ΔΟΜΗ ΤΟΥ ΜΗ ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΕΝΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΩΝ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΔΙΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΧΗΜΙΚΗΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ. ΜΕΡΙΚΗ, ΑΝΤΙΣΤΡΕΨΙΜΗ ΧΗΜΙΚΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΚΑΙ ΑΝΟΣΟΧΗΜΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΕΔΕΙΞΕ ΤΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ ΜΕ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ HSP90 (Η 90 - KDA ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΘΕΡΜΙΚΟΥ ΣΟΚ), P59 (Η ΡΟΤΑΜΑΣΗ FKBP52) ΚΑΙ ΜΕ ΜΙΑ ΑΓΝΩΣΤΗ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΜΕ ΜΒ 14 KDA (P14). Ο ΣΗΜΑΣΜΕΝΟΣ ΜΕ [^3H]21 - ΜΕΣΥΛ - ΔΕΞΑΜΕΘΑΖΟΝΗ ΥΠΟΔΟΧΕΑΣ ΕΜΦΑΝΙΣΤΗΚΕ, ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΛΗΡΗ ΧΗΜΙΚΗΣΥΝΔΕΣΗ, ΣΕ ΔΥΟ ΜΟΡΦΕΣ ΜΕ ΜΒ 288 AND 347 KDA. ΥΠΕΡΕΚΦΡΑΣΗ ΟΜΩΣ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ, ΣΤΑΘΕΡΑ Η ΜΕΤΑΒΑΤΙΚΑ, ΕΔΕΙΞΕ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΤΗΣ HSP70 (Η 70 - KDA ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΘΕΡΜΙΚΟΥ ΣΟΚ) ΑΛΛΑ ΚΑΙ ΤΗΣ HSP90 ΣΕ ΜΟΡΦΕΣ ΤΟΥ ΜΕ ΜΒ ~750 AND ~550 - KDA ΠΟΥ ΔΕΝ ΣΗΜΑΙΝΟΝΤΑΙ ΜΕ [^3Η]21 - ΜΕΣΥΛ - ΔΕΞΑΜΕΘΑΖΟΝΗ. Ο ΣΥΝΔΕΔΕΜΕΝΟΣ ΜΕ HSP70 ΥΠΟΔΟΧΕΑΣΒΡΕΘΗΚΕ ΝΑ ΣΥΝΔΕΕΤΑΙ ΣΕ GRES (ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΑΠΟΚΡΙΣΗΣ ΣΤΑ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΗ) IN VITRO ΑΠΟΥΣΙΑ ΟΡΜΟΝΗΣ ΚΑΙ ΑΝ ΚΑΙ ΔΕΝ ΕΙΝΑΙ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΑ ΕΝΕΡΓΟΣ ΝΑ ΚΑΤΑΣΤΕΛΛΕΙ ΤΗ ΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΕΝΕΡΓΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ. ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΠΙΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΘΕΡΜΙΚΟΥ ΣΟΚ ΣΤΗ ΔΟΜΗ ΚΑΙΤΗ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΗ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΚΥΤΤΑΡΩΝ HELA ΕΔΕΙΞΕ ΑΔΙΑΛΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ ΚΑΙ ΑΝΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΣΟ ΤΗΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥ ΝΑ ΣΥΝΔΕΕΙ ΟΡΜΟΝΗ ΟΣΟ ΚΑΙ ΤΗΣ ΕΞΑΡΤΩΜΕΝΗΣ ΑΠΟ ΤΟΝ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗΣ. ΕΠΙΣΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΤΗΝ ΚΑΝΟΝΙΚΗ ΘΕΡΜΟΚΡΑΣΙΑ ΑΝΑΠΤΥΞΗΣ ΟΔΗΓΗΣΕ ΣΕ ΑΝΑΤΑΞΗ ΤΗΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ ΟΡΜΟΝΗΣ ΚΑΙ ΤΟΥ ΡΥΘΜΟΥ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗΣ ΚΑΙ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΣΕ ΕΝΙΣΧΥΣΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ - ΣΤΟΧΟΥ(CAT, ΑΚΕΤΥΛΟΤΡΑΝΣΦΕΡΑΣΗ ΤΗΣ ΧΛΩΡΑΜΦΑΙΝΙΚΟΛΗΣ) ΠΙΘΑΝΑ ΛΟΓΩ ΣΤΑΘΕΡΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΟΥMRNA ΤΟΥ. ΘΕΡΜΙΚΟΣ ΕΘΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΠΑΓΩΓΗ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

IN ORDER TO EXAMINE THE SUBUNIT COMPOSITION OF [^3H]21 - DEXAMETHASONE - MESYLATE GLUCOCOTRICOID RECEPTOR WE USED BIFUNCTIONAL REAGENTS. PARTIAL AND REVERSIBLE RECEPTOR CROSS - LINKING AND IMMUNOLOCHEMICAL ANALYSIS REVEALED ITS ASSOCIATION WITH HSP90 (THE 90 - KDA HEAT SHOCK PROTEIN), P59 (THE ROTAMASE FKBP52)AND A THIRD 14 - KDA UNKNOWN PROTEIN (P14). THE FULLY CROSS - LINKED LABELED RECEPTOR WAS ELECTROPHORETICALLY RESOLVED IN TWO OLIGOMERIC COMPLEXES OF APPARENT MR 288 AND 347 KDA. RECEPTOR OVEREXPRESSION IN TRANSIENTLY AND STABLY TRANSFECTED CELLS REVEALED, HOWEVER, THAT HSP70 (THE 70 - KDA HEAT SHOCK PROTEIN)AND HSP90 INTERACT WITH RECEPTOR COMPLEXES OF ~750 AND ~550 - KDA THAT ARE NOT LABELED WITH [^3H]21 - DEXAMETHASONE - MESYLATE. THE OVEREXPRESSED RECEPTOR WAS FOUND TO CONSTITUTIVELY BIND TO GRES (GLUCOCORTICOID RESPONSIVE ELEMENTS) IN VITRO IN THE ABSENCE OF HORMONE AND INHIBIT THE TRANSACTIVATION CAPACITYOF THE TRANSCRIPTIONALLY ACTIVE RECEPTOR. NEXT, WE EXAMINED THE EFFECT OF HEAT SHOCK ON THE STRUCTURE AND THE TRANSCRIPTIONAL ACTIVITY OF THE GLUCOCORTICOID RECEPTOR. HEAT SHOCK OF HELA CELLS INACTIVATED THE HIGH - AFFINITY, HORMONE - BINDING CAPACITY AND NULLIFIED THE RATE OF RECEPTOR - MEDIATED TRASCRIPTION IN THE PRESENCE OF HORMONE. HORMONAL RESPONSIVENESS WAS RESTORED ON RETURNTO NORMAL TEMPERATURE CONCOMITANTLY WITH RECOVERY OF HIGH - AFFINITY, GLUCOCORTICOID - BINDING CAPACITY. HEAT INACTIVATION OF THE RECEPTOR WAS COINCIDENT WITH LOSS OF ITS SOLUBILITY. HOWEVER, A POTENTIATION OF GLUCOCORTICOID - INDUCED CAT (CHLORAMPHENICOL (ABSTRACT TRUNCATED)