Μελέτη της έκφρασης των δεικτών πολυδυναμικότητας στις ιδιοπαθείς φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου

Abstract

Developmentally early cells are mobilized into peripheral blood in Crohn's disease (CD) patients. OCT4, is considered to be important in sustaining the pluripotency of stem cells. OCT4 splicing variants are differentially expressed in pluripotent and non-pluripotent cells. Our study aims to investigate the expression pattern of OCT4 variants and SOX-2, an essential factor implicated in self-renewal and pluripotency, in tissue and blood samples from patients with IBD. Methods: Peripheral blood and tissue samples were collected from patients with active CD and ulcerative colitis (UC), and from healthy individuals. OCT4 expression was documented by Western blot, immunohistochemistry and by reverse transcription-real-time PCR. OCT4 isoform determination was documented using specific primers. SOX-2 expression levels were also evaluated. Results: OCT4 protein levels were significantly higher in CD tissue samples than in CD blood samples, and in UC tissue samples. OCT4 protein was localized mainly in the cytosol. In all samples, only the OCT4 pseudogenes and the OCT4B1 variant were detected. OCT4B1 expression levels were elevated in both tissue and blood samples from CD and UC cases compared to healthy controls. In CD patients only SOX-2 mRNA levels were found slightly increased compared to healthy controls. Conclusion: Our results suggest that OCT4 is expressed in patients with IBD. Furthermore, we found the presence of the OCT4B1 isoform in IBD in both tissue and blood samples. Our results have shown, that developmentally early cells might be mobilized into peripheral blood as result of tissue damage, indicating a possible role of these cells in repair of injured intestinal tract.

Τα αναπτυξιακά πρώιμα κύτταρα κινητοποιούνται στο περιφερικό αίμα ασθενών με νόσο του Crohn (CD). Η OCT4, θεωρείται σημαντική για τη διατήρηση της πολυδυναμικότητας των βλαστικών κυττάρων. Οι παραλλαγές ματίσματος OCT4 εκφράζονται διαφορετικά σε πολυδύναμα και μη-πολυδύναμα κύτταρα. Η μελέτη μας στοχεύει στη διερεύνηση του προτύπου έκφρασης των παραλλαγών OCT4 και του SOX-2, ενός σημαντικού παράγοντα που εμπλέκεται στην αυτοανανέωση και την πολυτροπικότητα, σε δείγματα ιστών και αίματος από ασθενείς με ΙΦΝΕ. Μέθοδοι: Συλλέχθηκαν δείγματα περιφερικού αίματος και ιστού από ασθενείς με ενεργό νόσο Crohn (ΝΚ) και ελκώδη κολίτιδα (ΕΚ) και από υγιή άτομα. Η έκφραση OCT4 τεκμηριώνεται με Westernblot ανάλυση, ανοσοϊστοχημεία και PCR αντίστροφης μεταγραφής σε πραγματικό χρόνο. Ο προσδιορισμός των ισομορφών OCT4 τεκμηριώνεται χρησιμοποιώντας συγκεκριμένους εκκινητές. Τα επίπεδα έκφρασης SOX-2 αξιολογήθηκαν επίσης. Αποτελέσματα: Τα επίπεδα πρωτεΐνης OCT4 ήταν σημαντικά υψηλότερα σε δείγματα ιστών ασθενών με ΝΚ από ό, τι σε δείγματα αίματος ασθενών με ΝΚ και σε δείγματα ιστών ΕΚ. Η OCT4 πρωτεΐνη εντοπίστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα. Σε όλα τα δείγματα, ανιχνεύθηκαν μόνο τα ψευδογονίδια του OCT4 και η ισομορφήOCT4B1. Τα επίπεδα έκφρασης OCT4B1 ήταν αυξημένα στα δείγματα ιστών και αίματος από ασθενείς με ΝΚ και ΕΚ, σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. Σε ασθενείς με ΝΚ μόνο τα επίπεδα mRNA του SOX-2 βρέθηκαν ελαφρώς αυξημένα σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. Συμπέρασμα: Τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι το OCT4 εκφράζεται σε ασθενείς με ΙΦΝΕ. Επιπλέον, διαπιστώσαμε την παρουσία της ισομορφής OCT4B1 σε δείγματα ιστών και αίματος ασθενών με ΙΦΝΕ. Τα αποτελέσματά μας έχουν δείξει ότι αναπτυξιακά πρώιμα κύτταρα θα μπορούσαν να κινητοποιηθούν στο περιφερικό αίμα ως αποτέλεσμα βλάβης ιστού, υποδεικνύοντας έναν πιθανό ρόλο αυτών των κυττάρων στην αποκατάσταση διάβρωσης του εντερικού σωλήνα.