Διερεύνηση του ρόλου του υποδοχέα FXR σε συσχέτιση με τα ογκογονίδια k Ras, c Myc και την τελομεράση στο αδενοκαρκίνωμα του παχέως εντέρου σε ιστικές μικροσυστοιχίες

Abstract

PurposeThe investigation of the role of the receptor FxR with that of the oncogenes k-ras, c-myc and telomerase (h-tert) in colorectal cancer at a protein level,and their relationship of expression with different clinicopathological parameters (gender, age, grade, stage, tumour location and diameter).MethodsFor the purposes of the study we used sixty (n=60) formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples of colorectal adeno¬carcinoma obtained by surgical resection, local or distant colectomies. The construction of tissue microarrays was accomplished using ATA-100 apparatus forming three paraffin blocks embedded with the whole 60 cases(1,5mm diameter tissue cylindrical cores). Followed up by microtome sectioning and hematoxylin-eosin( H&E) staining of the final blocks. Immunochemistry was performed using anti- FxR, anti-htert, anti-cmyc and anti-kras antibodies. Digital image analysis was used for the farnesoid X receptor,the oncogenes c-myc, k-ras and the molecule htert. Statistical analysis of the data was performed by applying the Spss v 20 statistical software.ResultsEvaluation confirmed, strong associations between FxR and c-myc (p=0,01), c-myc and the grade of differentiation of the examined neoplasms (p=0,021) c-myc with k-ras (p=0,026), c-myc with telomerase (p=0,001), k-ras with telomerase (p=0,025), FxR and age (p=0,022), h-tert and the diameter of the neoplasm (p=0,039) It seems there is no association of FxR with telomerase and k-ras.ConclusionsThe present study is the first that correlates the low expression of FXR with the carcinogenetic mechanisms in human tissues(colon).It was confirmed that low expression of FxR is obvious in the majority of the cases of colon cancer which were examined 53/60 (88,3%),possibly meaning that there is a direct association of the low expression of FxR and the development of colorectal cancer. Strong association was confirmed for the first time in human tissue between FxR and c-myc.Also association between c-myc and the grade of differentiation of the examined neoplasms . Therefore there are other unexplored pathways by which the association of FxR and c-myc are related with the general destabilization of the cell cycle. Probably the targeted activation of FxR in the early stages may have a preventive effect on colon cancer , thus having a further therapeutic option for colon adenocarcinoma

ΣκοπόςΗ διερεύνηση του ρόλου του υποδοχέα FxR με εκείνη των ογκογονιδίων k-ras, c-myc και της τελομεράσης (h-tert) στο αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου σε πρωτεϊνικό επίπεδο και o συσχετισμός της έκφρασης τους με διάφορες κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους. (φύλο, ηλικία, βαθμό διαφοροποίησης, στάδιο της νόσου, τοπογραφία του όγκου, τη μέγιστη διάμετρο του όγκου).ΜεθοδολογίαΤο υλικό μας αφορούσε σε κύβους παραφίνης εξήντα (n=60) σποραδικά πρωτοπαθή αδενοκαρκινώματα παχέους εντέρου προϊόντα τοπικής ή εκτεταμένης κολεκτομής Χρησιμοποιήθηκε το σύστημα ιστικής μικρο¬συστοιχιακής δημιουργίας ΑΤΑ 100 και συγκροτήθηκαν τρεις κύβοι παραφίνης με ενσωματωμένο το σύνολο των 60 όγκων ( ιστικων κυλινδρων διαμετρου 1.5mm). Επακολούθησε μικροτόμηση και χρώση με ηωσίνη-αιματοξυλίνη(Η&Ε) των τελικων κυβων. Πραγματοποιήθηκε ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας anti-FxR, anti-htert, anti-cmyc και anti-kras αντισώματα. Ψηφιακή ανάλυση εικόνας εφαρμό¬στηκε για τον υποδοχέα fxr, τα ογκογονίδια c-myc, k-ras και το μόριο h-tert.Ακολουθησε στατιστικη αναλυση με το λογισμικο Spss Statistics 20.ΑποτελέσματαΠροέκυψε ότι υπάρχουν ισχυρες συσχέτισεις μεταξύ των παρακάτω: FxR και c-myc (p=0,01), c-myc και της διαφο¬ροποίησης των εξεταζόμενων νεοπλασμάτων(p=0,021), c-myc με k-ras (p=0,026), c-myc με την τελομεράση (p=0,001), k-ras με την τελομεράση(p=0,025) , μεταξύ FxR και ηλικίας(p=0,022) και μεταξύ τελομεράσης και διαμέτρου του όγκου(p=0,039). Δεν βρέθηκε συσχέτιση του FxR με την τελομεράση και το k-ras.,ΣυμπεράσματαΗ παρούσα κλινικοεργαστηριακή μελέτη ήταν η πρώτη που συσχέτισε την υποέκφραση του FxR με τους ογκογενετικούς μηχανισμούς σε ανθρώπινους ιστούς (παχύ έντερο) Διαπιστώθηκε ότι η υποέκφραση του FxR είναι έκδηλη στην πλειονότητα των περιστατικών του καρκίνου του παχέος εντέρου(53/60 ή 88,3%) και πιθανώς σχετίζεται άμεσα με την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου στον άνθρωπο.Ανευρέθηκε σαφή συσχέτιση για πρώτη φορά στον ανθρώπινο ιστό μεταξύ του FxR και του c-myc. Επίσης βρέθηκε συσχέτιση του c-myc και της διαφοροποίησης των εξεταζόμενων νεοπλασμάτων. Συνεπώς υπάρχουν και έτεροι ανεξερεύνητοι δρόμοι μέσα από τους οποίους η συσχέτιση του FxR με το c-myc σχετίζονται με τη γενικότερη αποσταθεροποίηση του κυτταρικού κύκλου.Πιθανόν η στοχευμένη ενεργοποίηση του FXR στα πρώιμα στάδια να έχει προληπτική δράση για τον καρκίνο του παχέος εντέρου, έχοντας έτσι μία ακόμα θεραπευτική επιλογή για το αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου.