Καταγραφή νέων γονιδιακών μεταλλάξεων και γενετικών πολυμορφισμών σε νεογνά και παιδιά με θρόμβωση σε ποικίλες θέσεις

Abstract

The aim of the study was to compare the distributions of mutations/polymorphisms in genes affecting hemostasis (FV Leiden-FVL, FV H1298R-FVR2, FII 20210A, b-Fib 455G>A, FXIII V34L, PAI-1 4G, ΗΡΑ-1b) or homocysteine metabolism (MTHFR C677T, MTHFR A1298C) and combinations of them, among children with thrombosis and controls, and also to associate the carriage of these mutations/polymorphisms with their corresponding proteins in children with a thrombotic event. Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, coagulation tests and High Performance Liquid Chromatography (HPLC) were used for the detection of gene mutations/polymorphisms, hemostasis proteins and homocysteine levels, respectively, in 141 children with thrombosis at various sites (mean age: 5.3 years). Thirty one cases (22%) had congenital CNS thrombosis. At diagnosis, 26% of cases were neonates. Thrombosis was more frequent in boys (p=0.021). No studied mutation/polymorphism was found to be a risk factor for thrombosis, except for FVLeiden (odds ratio 3.8, 95% CΙ 1.4-10.6), the presence of which was twice as high in children with congenital thrombosis (odds ratio 6.82, 95% CΙ 2.0-22.8). The risk of thrombosis for FVLeiden carriers was also twice as high in children with idiopathic thrombosis (odds ratio 5.7) than in thrombosed children with secondary thrombosis (odds ratio 2.7). FVLeiden carriers had an odds ratio of 5.9 (95% CI 1.8-19.6) in the absence of FVR2. The joint distributions of MTHFR C677T and MTHFR A1298T and FXIII Val34Leu with PAI-1 4G were the same among children and controls. In thrombosed children, activated protein C resistance ratio was significantly lower in the presence of FVLeiden (p<0.001). Fibrinogen levels, although higher in the presence of b-Fib 455g>A, did not reach statistical significance, neither prothrombin levels were higher in FII20210A carriers, except in the subgroup of patients with CNS thrombosis. Double heterozygotes in both MTHFR C677T and MTHFR A1298T or homozygotes in either of them had significantly elevated homocysteine levels than in heterozygotes for one or the carriers of the wild type. Hyperhomocysteinaemia was only detected in three cases.

Σκοπό της παρούσας μελέτης απετέλεσε η σύγκριση της συχνότητας κατανομής εννέα μεταλλάξεων/πολυμορφισμών σε γονίδια που εμπλέκονται στην αιμόσταση (FV Leiden, FV HR₂, FII 20210Α, b-Fib 455G>A, FXIII Val34Leu, PAI-1 4G , ΗΡΑ-1b) και το μεταβολισμό της ομοκυστείνης (MTHFR C677T, MTHFR A1298C), καθώς και επιλεκτικών συνδυασμών τους, μεταξύ παιδιών με θρόμβωση και μαρτύρων. Επίσης, στα παιδιά με θρόμβωση, συσχετίσθηκε η φορεία αυτών των μεταλλάξεων/πολυμορφισμών με τα επίπεδα των αντιστοίχως κωδικοποιούμενων πρωτεϊνών. Τεχνική αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR), πηξιολογικές δοκιμασίες και υγρή χρωματογραφία υψηλής πιέσεως (HPLC) χρησιμοποιήθηκαν, αντιστοίχως, για τον προσδιορισμό των μεταλλάξεων/πολυμορφισμών, των πρωτεϊνών ή άλλων παραμέτρων της αιμόστασης και των επιπέδων της ομοκυστεΐνης σε 141 παιδιά με θρόμβωση σε ποικίλες θέσεις, μέσης ηλικίας 5.3 χρόνων, εκ των οποίων 31 παιδιά (22%) είχαν αναπτύξει το θρομβωτικό επεισόδιο στο κεντρικό νευρικό σύστημα ενδομητρίως. Το 26% ήταν νεογνά κατά τη διάγνωση. Οι ασθενείς συγκρίθηκαν με 103 μάρτυρες. Η θρόμβωση ήταν συχνότερη στα αγόρια (p=0.021). Ουδείς εκ των μελετηθέντων πολυμορφισμών βρέθηκε να είναι παράγοντας κινδύνου για θρόμβωση, εκτός από τον παράγοντα V Leiden (odds ratio 3.8,95% CI 1.4-10.6). Ο κίνδυνος ήταν διπλάσιος στην ομάδα των παιδιών με ενδομήτριο θρομβωτικό επεισόδιο (odds ratio 6.82, 95% CI 2.0-22.8). Η πιθανότητα για θρόμβωση ήταν δύο φορές μεγαλύτερη στους φορείς FVLeiden που είχαν ιδιοπαθή θρόμβωση (odds ratio 5.4) σε σχέση με τους ασθενείς που είχαν δευτεροπαθή θρόμβωση (odds ratio 2.7). Οι φορείς FVLeiden είχαν σχεδόν εξαπλάσια πιθανότητα να υποστούν θρομβωτικό επεισόδιο (odds ratio 5.7 95% CI 1.8-19.6), όταν ο πολυμορφισμός FVR₂ απουσίαζε. Η συνδυασμένη κατανομή της μετάλλαξης MTHFR C677T με MTHFR A1298C και του πολυμορφισμού FXIII Va134Leu με PAI-1 4G δεν διέφερε μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Στα παιδιά με θρόμβωση, ο λόγος της αντίστασης στην ενεργοποιημένη πρωτεΐνη C βρέθηκε σημαντικά χαμηλότερος στους φορείς FVL (p<0.001). Δεν βρέθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά στα επίπεδα του ινωδογόνου, αν και υψηλότερα, στους φορείς b-Fib 455G>A σε σχέση με τους μη φορείς, ούτε και στα επίπεδα της προθρομβίνης στους φορείς FII 20210Α, εκτός από την υποομάδα των παιδιών με έμφρακτο ΚΝΣ , σε σχέση με τους μη φορείς (p<0.05). Οι ομοζυγώτες σε μία από τις δύο μεταλλάξεις MTHFR C677T και MTHFR A1298C ή οι διπλοί ετεροζυγώτες είχαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα ομοκυστείνης σε σχέση με τους ετεροζυγώτες σε μία μόνο μετάλλαξη ή τους μη φορείς, όχι, όμως, υπερομοκυστιναιμία, πλην τριών περιπτώσεων.