ΜΕΛΕΤΕΣ ΕΠΙ ΤΗΣ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗΣ Ρ ΑΠΟ ΤΟΝ ΜΥΞΟΜΥΚΗΤΑ DICTYOSTELIUM DISCOIDEUM

Abstract

RIBONUCLEASE P(RNASE P), THE ENZYME RESPONSIBLE FOR THE MATURATION OF 5' TERMINI OF PRECURSOR TRNAS, IS A RIBONUCLEOPROTEIN. THE RNA SUBUNIT OF RNASE P FROMEUBACTERIA ONLY, IS THE CATALYTIC SUBUNIT OF THE ENZYME. RNASE P FROM THE SLIME MOLD DICTYOSTELIUM DISCOIDEUM HAS BEEN PURIFIED 2.059 - FOLD. THE ENZYME SHOWS OPTIMAL ACTIVITY IN THE PRESENCE OF 5MM MGCL2 AND 10MM NH4CL OR 5MM KCL, AT PH 7.6 AND INCUBATION T 37 C. THE APPARENT KM AND THE APPARENT VMAX ARE 240 NM AND 3.6 PMOL/MIN RESPECTIVELY. D.DISCOIDEUM RNASE P IS SENSITIVE TO TREATMENT EITHER WITH MICROCCOCAL NUCLEASE OR PROTEINASE K, INDICATING ITS RIBONUCLEIC CHARACTER. THE ENZYME HAS A BUOYANT DENSITY OF 1.23 G/ML, INDICATING A LOW RNA/PROTEIN RATIO FOR THE HOLOENZYME. THE RNA SUBUNIT OF THE ENZYME HAS A SIZE OF ~400NT AND ITS PROBABLY CATALYTIC. ALTHOUGH D.DISCOIDEUM RNASE P HAS AN ABSOLUTE REQUIREMENT FOR MG^2+, WE FOUND THAT ALSO CA^2+, SR^2+ AND BA^2+ CANSUPPORT ENZYME ACTIVITY, BUT ONLY IN THE PRESENCE OF LOW MG ^2+ CONCENTRATIONS.

Η ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕIΣΗ P (RNASE P), ΕΝΖΥΜΟ ΥΠΕΥΘΥΝΟ ΓΙΑ ΤΗΝ ΩΡΙΜΑΝΣΗ ΤΟΥ 5 ΑΚΡΟΥ ΤΩΝ ΠΡΟΔΡΟΜΩΝ ΜΟΡΙΩΝ TRNA, ΕΙΝΑΙ ΜΙΑ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΠΡΩΤΕΙΝΗ. Η ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ RNA ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΑΠΟ ΕΥΒΑΚΤΗΡΙΑ, ΕΙΝΑΙ Η ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ. Η ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗP ΑΠΟ ΤΟΝ DICTYOSTELIUM DISCOIDEUM, ΚΑΘΑΡΙΣΤΗΚΕ 2.059 ΦΟΡΕΣ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ, ΠΑΡΟΥΣΙΑ 5MM MGCL2 ΚΑΙ 10MM ΝΗ4CL Η 5MM KCL, ΕΝΩ ΤΑ ΒΕΛΤΙΣΤΑ PH ΚΑΙ Τ ΒΡΕΘΗΚΑΝ 7.6 ΚΑΙ 37 C ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. Η ΦΑΙΝΟΜΕΝΙΚΗ KM ΚΑΙ VMAX ΒΡΕΘΗΚΑΝ 240 NM ΚΑΙ 3.6 PMOL/MIN ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΤΟΣΟ ΣΕ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑ ΜΕ ΜΙΚΡΟΚΟΚΚΙΚΗ ΝΟΥΚΛΕΑΣΗ, ΟΣΟ ΚΑΙ ΜΕ ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΗ Κ, ΓΕΓΟΝΟΣ ΠΟΥ ΥΠΟΔΗΛΩΝΕΙ ΟΤΙ ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΤΟΣΟ ΑΠΟ RNA ΟΣΟ ΚΑΙ ΑΠΟ ΠΡΩΤΕΙΝΗ. Η ΠΥΚΝΟΤΗΤΑ ΕΠΙΠΟΛΗΣ ΒΡΕΘΗΚΕ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΦΥΓΟΚΕΝΤΡΗΣΗ ΣΕ ΒΑΘΜΙΔΩΣΗ ΠΥΚΝΟΤΗΤΑΣ ΘΕΙΙΚΟΥ ΚΕΣΙΟΥ, 1.23G/ML ΚΑΙ ΕΙΝΑΙ Η ΜΙΚΡΟΤΕΡΗ ΠΟΥ ΑΝΑΦΕΡΕΤΑΙ ΣΤΗΝ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ. Η ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ RNA ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ ΕΙΝΑΙ ~400NT ΚΑΙ ΠΙΘΑΝΟΤΑΤΑ ΕΙΝΑΙ Η ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ. Η ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ ΑΥΤΗ ΓΙΝΕΤΑΙ ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ ΣΕ ΕΝΖΥΜΟ RNASE P ΑΠΟ ΕΥΚΑΡΙΩΤΙΚΟ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟ. ΤΕΛΟΣ, ΤΟ CA^2+, ΤΟ SR ^2+ ΚΑΙ ΤΟ BA^2+ ΜΠΟΡΟΥΝ ΝΑ ΥΠΟΣΤΗΡΙΞΟΥΝ ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΜΙΚΡΩΝ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΩΝ MG^2+.