Ο φαινότυπος και η μετάδοση του ενδοκυττάριου μηνύματος των Β λεμφοκυττάρων σε ασθενείς με συστηματική σκληροδερμία

Abstract

The objective of the study was to explore the phenotype and intracellular signaling events of B cells in patients with systemic sclerosis (SSc). Peripheral blood B cell surface markers CD19 and CD22 were evaluated by flow cytometry in 23 patients with SSc and seven healthy individuals. Levels of intracellular kinases Lyn, Syk and P-Y 348 Syk along with phosphatase SHP-1 were examined with Western immunoblotting in selected patients. P-Y 822 CD22 was subsequently evaluated flow cytometrically in antigen receptor stimulated B cells. A statistically significant decrease in CD22 B cell surface expression was found in the diffuse subset of patients (median CD22 MFI ± SD was 5.90 ± 2.35 vs 10.20 ± 1.88 for patients vs healthy controls respectively; p=0.021), while no statistically significant change was found regarding CD19. CD22 under-expression was more pronounced when interstitial lung disease (ILD) was present (median CD22 MFI ± SD was 5.90 ± 2.25 vs 10.20 ± 1.88 for patients with ILD vs healthy controls respectively; p=0.011). CD22 phosphorylation following B cell receptor (BCR) stimulation was also found to be impaired in patients with diffuse SSc (median change in MFI ± SD was 0.28 ± 0.09 vs 0.38 ± 0.08 for patients vs healthy controls respectively; p=0.034). Low CD22 expression was arithmetically correlated with kinase Lyn under-expression (Pearson coefficient 0.926; p=ns) in B cells from a small sample of patients. These results suggest that CD22 under-expression and impaired phosphorylation along with implications for Lyn kinase aberrations could contribute to the activated B cell phenotype in SSc.

Ο σκοπός της εργασίας ήταν η μελέτη του φαινοτύπου και της ενδοκυττάριας σηματοδότησης των Β λεμφοκυττάρων σε ασθενείς με συστηματική σκληροδερμία (ΣΣ). Οι επιφανειακοί δείκτες CD19 και CD22 εξετάστηκαν με κυτταρομετρία ροής σε περιφερικό αίμα 23 ασθενών με ΣΣ και 7 υγιών εθελοντών. Μελετήθηκαν επίσης τα επίπεδα των ενδοκυττάριων κινασών Lyn, Syk και P-Y 348 Syk και της φωσφατάσης SHP-1 με μέθοδο ανοσοαποτυπώματος κατά Western σε επιλεγμένους ασθενείς. Σε μεταγενέστερο χρόνο ελέγχθηκε η φωσφορυλίωση του CD22 στη θέση τυροσίνης 822 με κυτταρομετρία ροής σε Β λεμφοκύτταρα μετά από διέγερση του Β κυτταρικού υποδοχέα (BCR). Στατιστικά σημαντική ελάττωση διαπιστώθηκε στην επιφανειακή έκφραση του CD22 στους ασθενείς με διάχυτη ΣΣ (διάμεση τιμή του CD22 MFI ± SD ήταν 5.90 ± 2.35 έναντι 10.20 ± 1.88 για τους ασθενείς έναντι των υγιών αντίστοιχα, p=0.021), ενώ δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά ως προς το CD19. Η ελαττωμένη έκφραση του CD22 ήταν εντονότερη όταν συνυπήρχε διάμεση πνευμονοπάθεια (διάμεση τιμή του CD22 MFI ± SD ήταν 5.90 ± 2.25 έναντι 10.20 ± 1.88 για τους ασθενείς με διάμεση πνευμονοπάθεια έναντι των υγιών αντίστοιχα, p=0.011). Η φωσφορυλίωση του CD22 μετά από διέγερση του BCR διαπιστώθηκε ότι είναι επίσης ελαττωμένη στη διάχυτη νόσο (διάμεση τιμή διαφοράς του MFI ± SD ήταν 0.28 ± 0.09 έναντι 0.38 ± 0.08 για τους ασθενείς έναντι των υγιών αντίστοιχα, p=0.034). Η ελαττωμένη επιφανειακή έκφραση του CD22 συσχετίσθηκε αριθμητικά με υποέκφραση της κινάσης Lyn (Pearson coefficient 0.926, p=ns) σε Β λεμφοκύτταρα από ένα μικρό αριθμό ασθενών. Η ελαττωμένη επιφανειακή έκφραση και φωσφορυλίωση του CD22 μαζί με πιθανή διαταραχή στην έκφραση της κινάσης Lyn μπορεί να συνεισφέρουν στον ενεργοποιημένο φαινότυπο του Β λεμφοκυττάρου στη ΣΣ.