Γενετικοί δείκτες (HLA αντιγόνα, μόρια προσκόλλησης και μόρια συνδιέργεσης) σε καρκίνο παχέος εντέρου: κυτταρική, ορολογική, ιστολογική μελέτη

Abstract

Introduction: A large number of epidimiological studies have shown an increase in the frequency of colorectal carcinomas. The development of cancer is the result of enviromental factors, changes in genes related to development and cell proliferation but also a disterbance of immune surveilance and reaction. Aim of the study: To investigate the expression of several markers that are likely to be involved in the pathogenesis and expansion of colon cancer. The measurements were associated with the clinical stage of the cancer and the tumor size. Materials and Methods: In this study 133 patints with colorectal carcinoma were included. The median age was 63 years. Clinically the extent of the disease was assesed with Dukes staging. The study involved 1) HLA class I and II antigens typing in patients and healthy donors, 2) analysis of soluble adhesion molecules (E-cadherin, E-selectin, ICAM-1 και VCAM-1 ) with ELISA 3) evaluation of expression of HLA antigens, and co-stimulatory molecules in cancer and displastic cells and in normal epithelium histoligically and 4) immunophenotypic study of leucocytic sub-populations, adhesion molecules and costimulatory molecules in the tumor and in the healthy boundaries with flow cytometry. Results: α) incresed incidence of expression of HLA-Cw3 (p=0.003), HLA-Cw7 (p=0.04), HLA-DR4 (p=0.02) and HLA-DR16 (p=0.01) antigens in comparison to healthy volunteers, and specifically the expression of HLA-Cw3 antigen (p=0.001) in patients in stages C and D β) increased expression of soluble E-cadherin in the serum of cancer patients were co-related with smaller size of tumor (p=0.001) and additionally elevated levels of s-VCAM (p=0.045) και s-ICAM (p=0.022) were seen in the reactive fibrosis surrounding area c) histologically, reduction in the expression of E-cadherin (p=0.004) and co-stimulatory molecule CD80 (p<0.001)andCD86 (p=0.003) and increasd expression of HLA-DR (p<0.001) in cancer cells was found in comparison to the surrounding healthy boundaries d) flow cytometric analysis revealed an increase in HLA-ABC expression in cancer cells from patients with increased tumor size in comparison to healthy tissue (p=0.027).Conclusion: The findings of this study reinforce the idea that the immune system through a variety of factors, including the markers tested, can affect the growth and metastatic spread of colon cancer. However, more studies are required for the final assessment of the significance of the aforementioned indices in pathogenesis of the disease.

Μεγάλος αριθμός επιδημιολογικών μελετών αναδεικνύουν αύξηση της συχνότητας εμφάνισης του καρκίνου του παχέος εντέρου. Η ανάπτυξη του καρκίνου είναι το αποτέλεσμα επίδρασης περιβαλλοντικών παραγόντων, γενετικών αλλαγών σε γονίδια τα οποία ελέγχουν την ανάπτυξη και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, αλλά και διαταραχών της ανοσιακής επιτήρησης και απάντησης.Σκοπός της μελέτης είναι να διερευνηθεί η έκφραση διαφόρων γενετικών δεικτών που πιθανολογείται ότι εμπλέκονται στην παθογένεια και την εξάπλωση του καρκίνου του παχέος εντέρου. Οι μετρήσεις συσχετίστηκαν με το κλινικό στάδιο του καρκίνου και το μέγεθος του όγκου. Υλικό-Μέθοδοι: Το υλικό της μελέτης απετέλεσαν 133 ασθενείς με πρωτοπαθή καρκίνο του παχέος εντέρου. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν τα 63 έτη. Κλινικά η έκταση της νόσου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη σταδιοποίηση κατά Dukes. Ο έλεγχος περιελάμβανε: α) Τυποποίηση των HLA τάξης Ι (-Α, -Β, -C) και ΙΙ (-DR, -DQ) αντιγόνων σε ασθενείς με καρκίνο παχέος εντέρου και υγιείς μαρτύρες, με τη χρήση ορολογικών τεχνικών (μικρολεμφοκυτταροτοξικότητας-CDC) β) Αναζήτηση διαλυτών μορίων προσκόλλησης (E-cadherin, E-selectin, ICAM-1 και VCAM-1 ) στον ορό των ασθενών με ELISA γ) Προσδιορισμό της έκφρασης HLA αντιγόνων, μορίων προσκόλλησης και μορίων συνδιέγερσης στα καρκινικά κύτταρα, στα δυσπλαστικά κύτταρα καθώς και στο φυσιολογικό επιθήλιο στα υγιή όρια του όγκου με ανοσοϊστοχημική χρώση. δ) Ανοσοφαινοτυπική μελέτη λευκοκυτταρικών υποπληθυσμών, μορίων προσκόλλησης καθώς και μορίων συνδιέγερσης στα κύτταρα που διηθούν τον όγκο και τον πέριξ υγιή ιστό, με τη χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων συνδεδεμένων με φθορίζουσες ουσίες και κυτταρομετρία ροής.Αποτελέσματα: α) Όσον αφορά την πληθυσμιακή κατανομή των HLA αντιγόνων οι ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου παρουσίασαν αυξημένη συχνότητα των HLA-Cw3 (p=0.003), HLA-Cw7 (p=0.04), HLA-DR4 (p=0.02) και HLA-DR16 (p=0.01) αντιγόνων σε σχέση με τους μάρτυρες, ενώ ιδιαίτερα αυξημένη ανευρέθη η παρουσία του HLA-Cw3 αντιγόνου (p=0.001) σε ασθενείς με επιθετική μορφή καρκίνου (στάδιο C και D). β) Από τη μελέτη διαλυτών μορίων στον ορό, αυξημένα επίπεδα του μορίου προσκόλλησης E-cadherin στο πλάσμα των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου συσχετίστηκαν με μικρότερο μέγεθος όγκου (p=0.001) και επιπλέον ασθενείς που παρουσίασαν αντιδραστική ίνωση στην περιοχή γύρω από τον όγκο έδειξαν στατιστικά σημαντική αύξηση των επιπέδων των μορίων προσκόλλησης s-VCAM (p=0.045) και s-ICAM (p=0.022). γ) Από την ανοσοϊστοχημική χρώση ανευρέθη μειωμένη έκφραση της E-cadherin (p=0.004) και των μορίων συνδιέγερσης CD80 (p<0.001) και CD86 (p=0.003) και αυξημένη έκφραση του HLA-DR (p<0.001) στα καρκινικά κύτταρα σε σχέση με τα υγιή περιβάλλοντα τον όγκο κύτταρα. δ) Από την κυτταρομετρική ανάλυση παρατηρήθηκε ότι ασθενείς με αυξημένο μέγεθος όγκου είχαν μικρότερο ποσοστό έκφρασης του HLA-ABC στον καρκινικό ιστό σε σχέση με τον περιβάλλοντα ιστό (p=0.027).Συμπέρασμα: Τα ευρήματα της παρούσας μελέτης ενισχύουν στην άποψη ότι το ανοσολογικό σύστημα, μέσω ποικίλων παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων και των γενετικών δεικτών που ελέγχθησαν, μπορεί να επηρεάσει την ανάπτυξη και μεταστατική διασπορά του καρκίνου του παχέος εντέρου. Ωστόσο, περισσότερες μελέτες είναι αναγκαίες για την τελική αξιολόγηση της σημασίας των προαναφερθέντων δεικτών στην αιτιοπαθογένεια της νόσου.