Ανάλυση των μοριακών και λειτουργικών αλληλεπιδράσεων μεταξύ των πυρηνικών ρυθμιστικών πρωτεϊνών του ιού του απλού έρπητα και της ιϊκής χρωματίνης

Abstract

The high mobility group protein(HMGA1)is a small non-histon protein that regulate mommalian gene expression by altring chromatin architecture.In the present work both the physical interactin of HMGA1 with immediate-early (IE) regylatory sequences of herpes simplex virus(HSV-1) and its functional role was investigated. By using electrophoretic mobility shiftassays and DNacue i footprinting analysis it was found that HMGA1 binds in vitro at multiple sites within the promoter/regulatory regions of all immediate-early(IE) genes of herpes simlex virus. Chromatin immunoprecipitations recified that these HMGA1 interactions take place in vivo and defined the temporal pattern og its bibnding to virus DNA during the course of an infection.ICP4, the major HSV-1 regulatory protein, was also found to bind all IE regulatory sequences, both in vitro and in vivo and its in vitro DNA binding was enhonced by HMGA1. Trasient expression experiments demonstrated that HMGA1 alters IE gene expression in vivo both in the absence or presence of viral proteins.These effects were both promoter-and viral protein-specific. These findings suggest that HMGA1 can affect IE gene expression, and the progress of a lytic HSV-1 infection, in vivo.

Οι πρωτεϊνες υψηλής κινητικότητας(HMGA)είναι μικρές μη-ιστονικές πρωτεϊνες που ρυθμίζουν τη γονιδιάκη έκφραση των θηλαστικών τροποποιώντας τη δομή της χρωματίνης.Στην παρούσα διατριβή μελετήθηκε τόσο η φυσική αλληλεπίδραση της HMGA1 με τις ρυθμιστικές αλληλουχίες των άμεσα-πρώιμων γονιδίων του απλού έρπητα(HSV-1) όσο και ο λειτουργικός της ρόλος.Με τη χρήση πειραμάτων καθυστέρησης της ηλεκτροφορητικής κινητικότητας και αποτυπώματος DNασηςI βρέθηκε ότι η HMGA1 συνδέεται in vitro σε πολλαπλές περιοχές του υποκινητή/ενισχυτή των άμεσα-πρώιμων γονιδίων του απλού έρπητα.Πειράματα ανοσοκατακρήμνισης της χρωματίνης επιβεβαίωσαν την in vivo σύνδεση της HMGA1 καθόρισαν την κινητική της σύνδεσης της με το ιϊκο DNA κατά τη διάρκεια της μόλυνσης. Η IOP4, η κύρια ρυθμιστική πρωτεϊνη του απλού έρπητα έγινε φανερό ότι συνδέεται με τις ρυθμιστικές αλληλουχίες των άμεσα-πρώιμων γονιδίων τόσο in vitro όσο και in vivo και η in vitro σύνδεσή της στο DNA ενισχύεται από την παρουσία της HMGA1. Πειράματα παροδικής επιμόλυνσης κατέδειξαν την ικανότητα της HMGA1 να επιδρά in vivo στη γονιδιακή έκφραση των άμεσα-πρώιμων γονιδίων είτε απουσία ή παρουσία ιϊκών πρωτεϊνων. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η HMGA1 συμμετέχει στη ρύθμιση της έκφρασης των άμεσα-πρώιμων γονιδίων και συνεπώς στην ολοκλήρωση του αναπαραγωγικού κύκλου του ιού του απλού έρπητα.