Επιδημιολογική διερεύνηση κλινικών στελεχών P. aeruginosa από νοσοκομειακούς ασθενείς

Abstract

During the period 2006-2007 a total of 952 P. aeruginosa strains were isolated in the Microbiology Laboratory of the University Hospital of Patras. Two hundred and forty, the first ten from every month no replicate isolates (one isolate per patient), were selected to be studied further. The strains were isolated after inoculation of clinical specimens: wound-liquids, intravenous catheters, respiratory samples, urine, stool and blood. P. aeruginosa was identified by standard phenotypic methods. The clinical samples were collected from patients hospitalized in the ICU, Internal Medicine, Surgical Units, Pediatric Unit and the Department of Outpatients. Phenotypic and molecular methods were applied for the epidemiological study. Phenotypic methods were: antibiotic susceptibility testing, metallo-beta-lactamases (MBL) production and serotyping. The molecular methods included detection of genes blaVIM, exoY, exoT, exoS, exoU by PCR, blaVIM gene sequencing, PFGE (SpeI) and MLST.The majority of isolates were infection-related (65,42%). Most of them were recovered from ICU patients (92/240, 38%), 61% (56/92) of which were colonizing isolates. Most strains were MDRPA (63,33%) and belonged to serotype O11 (49,16%). Thirty three percent (33%) of imipenem non-susceptible isolates were blaVIM positive (specifically blaVIM2, and blaVIM1). PFGE exhibited five main types: a, d, b, c and s [predominant a (33,75%), d (13,75%)]. By MLST, the strains were classified mainly in the two international clones ST235 (PFGE types a, d and b), and ST111 (PFGE type b).The present study revealed an outbreak of MDRPA in the University Hospital of Patras. MDRPA belonged mainly to PFGE types a and d of serotype O11 and clone ST235, showing the profile exoU +/exoS -, and predominaded in ICU. The observation that most colonizing isolates (49/83) belonged to ST235 indicates that colonization during ICU hospitalization contributes to infection and spread of MDRPA to other wards. The fact that the majority (18/33) of PFGE type d strains (ST235) carry blaVIM2 gene, reinforces that clonal spread may have played a role in the outbreak of imipenem non-susceptible P. aeruginosa strains.

Κατά τη χρονική περίοδο 2006-2007 απομονώθηκαν συνολικά 952 στελέχη P. aeruginosa στο Μικροβιολογικό Εργαστήριο του ΠΓΝΠ. Επιλέχθηκαν για μελέτη 240 στελέχη, τα πρώτα δέκα από κάθε μήνα και ένα στέλεχος από κάθε ασθενή. Τα στελέχη απομονώθηκαν μετά από καλλιέργεια κλινικών δειγμάτων: τραυμάτων-υγρών, κεντρικών φλεβικών καθετήρων, αναπνευστικού συστήματος, ούρων, κοπράνων και αίματος. Τα κλινικά δείγματα προέρχονταν από ασθενείς που νοσηλεύονταν στη ΜΕΘ, τις Παθολογικές Κλινικές, τις Χειρουργικές Κλινικές, την Παιδιατρική Κλινική και προσέρχονταν στα Εξωτερικά Ιατρεία του ΠΓΝΠ. Φαινοτυπικές και μοριακές μεθόδοι χρησιμοποιήθηκαν για την επιδημιολογική διερεύνηση των στελεχών. Ανιχνεύθηκε ο βιότυπος, έγινε έλεγχος της ευαισθησίας στα αντιβιοτικά, έλεγχος της παραγωγής MBLs και ορολογική τυποποίηση των στελεχών. Οι μοριακές μέθοδοι περιλάμβαναν την ανίχνευση των γονιδίων blaVIM, exoY, exoT, exoS και exoU με PCR, τυποποίηση του γονιδίου blaVIM με ανάλυση της αλληλουχίας και εφαρμογή των μεθόδων PFGE (SpeI) και MLST ταυτοποίηση κλώνων. Τα περισσότερα στελέχη εμπλέκονταν σε λοιμώξεις (65,42%). Τα περισσότερα δείγματα προήλθαν από τη ΜΕΘ (92/240, 38%), σημαντικό ποσοστό των οποίων αφορούσε τη χλωρίδα των ασθενών (56/92, 61%). Τα περισσότερα στελέχη ήταν MDRPA (63,33%) και άνηκαν στον ορότυπο Ο11 (49,16%). Το 33% των ιμιπενέμη ανθεκτικών στελεχών ήταν blaVIM θετικά (κυρίως blaVIM2, και blaVIM1). Με την PFGE τα στελέχη διακρίθηκαν σε 5 κύριους τύπους a, d, b, c και s, με επικρατούντες τους a (33,75%) και d (13,75%). Με την MLST τα στελέχη διακρίθηκαν κυρίως στους δύο παγκόσμιους κλώνους ST235 (PFGE τύποι a, d και b) και ST111 (PFGE τύπος b). Η παρούσα μελέτη αναδεικνύει μία επιδημική έξαρση από MDRPA στο ΠΓΝΠ. Τα MDRPA ανήκαν κυρίως στους PFGE τύπους a και d του ορότυπου Ο11 και κλώνου ST235, με γονοτυπικό προφίλ exoU +/exoS - που επικρατούσαν στη ΜΕΘ. Η παρατήρηση ότι τα περισσότερα στελέχη που απομονώθηκαν από δείγματα αποικισμού των ασθενών (49/83) ανήκαν στον κλώνο ST235 υποδεικνύει ότι ο αποικισμός των ασθενών της ΜΕΘ συμβάλλει στη λοίμωξη από στελέχη P. aeruginosa και στη διασπορά τους στις άλλες κλινικές του νοσοκομείου. Το γεγονός ότι τα περισσότερα των στελεχών (18/33) του PFGE τύπου d (ST235) φέρουν το γονίδιο blaVIM2 ενισχύει την άποψη ότι η κλωνική διασπορά διαδραμάτισε ρόλο στην επιδημική έξαρση από ιμιπενέμη-ανθεκτικά στελέχη P. aeruginosa.