Πρωτεϊνική μηχανική και χαρακτηρισμός του ενζύμου μεταφοράση του γλουταθείου

Περίληψη

Πραγματοποιήθηκε μοριακή και κινητική μελέτη του ισοενζύμου GmGSTU4-4 από Glycine max. Ειδικότερα πραγματοποιήθηκε ετερόλογη έκφραση σε Ε. coli και καθαρισμός του ενζύμου μέσω χρωματογραφίας συγγένειας. Πραγματοποιήθηκε κινητική μελέτη της καταλυτικής αντίδρασης και προσδιορίστηκαν οι κινητικές σταθερές για διαφορετικά υποστρώματα. Μελετήθηκε και αναλύθηκε η τρισδιάστατη δομή του ενζύμου και επιλέχτηκαν τα αμινοξικά κατάλοιπα Ser13, Asn48, Pro49, Tyr107, Arg111 τα οποία αποτέλεσαν στόχο κατευθυνόμενης μεταλλαξογένεσης. Οι μεταλλαγμένες μορφές Ser13Ala, Asn48Ala, Pro49Ala, Tyr107Ala, Arg111Ala εκφράστηκαν σε Ε. coli καθαρίστηκαν και χαρακτηρίστηκαν με κινητική ανάλυση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα παραπάνω αμινοξικά κατάλοιπα συμμετέχουν άμεσα η έμμεσα στον καταλυτικό μηχανισμό. Επίσης, μελετήθηκε η αναστολή της ενζυμικής δραστικότητας από μεγάλη ποικιλία ξενοβιοτικών ενώσεων (φυτοφάρμακα, εντομοκτόνα τριαζινο χρωστικές). Στη συνέχεια έγινε ανασχεδιασμός του ενζύμου GmGSTU4-4 εφαρμόζο ...
περισσότερα

Περίληψη σε άλλη γλώσσα

A GST isoezyme (GmGSTU4-4) belonging to tau class from Glycine max was expressed in Ε. coli purified by affinity chromatography and its structural and catalytic properties were investigated. Steady state kinetic analysis for selected substrates was carried out and the kcat and Km parameters were determined. The purified GmGSTU4-4 isoenzyme was subjected to structural determination using X-ray crystallography. Site directed mutagenesis was used to evaluate the role of Ser13, Asn48, Pro49, Tyr107 and Arg111 in catalysis. The mutants Ser13Ala, Asn48Ala, Pro49Ala, Tyr107Ala, Arg111Ala were expressed in Ε. colt purified and their kinetic properties were investigated by steady state kinetic analysis. The results established the direct or indirect involvement of these residues in the catalytic mechanism. In order to create in vitro enzyme variants with desired properties such as enhanced enzyme activity towards specific xenobiotic compounds GmGSTU4-4, GmGST2 and GmGST10 from Glycine max were ...
περισσότερα
Πρέπει να είστε εγγεγραμένος χρήστης για έχετε πρόσβαση σε όλες τις υπηρεσίες του ΕΑΔΔ  Είσοδος /Εγγραφή

Όλα τα τεκμήρια στο ΕΑΔΔ προστατεύονται από πνευματικά δικαιώματα.

Διεύθυνση Handle
http://hdl.handle.net/10442/hedi/26672
ND
26672
Εναλλακτικός τίτλος
Protein engineering and characterization of glutathione transferase
Συγγραφέας
Αξαρλή, Ειρήνη Αθανάσιος
Ημερομηνία
2009
Ίδρυμα
Γεωπονικό Πανεπιστήμιο Αθηνών. Τμήμα Γεωπονικής Βιοτεχνολογίας. Εργαστήριο Ενζυμικής Τεχνολογίας
Εξεταστική επιτροπή
Λάμπρου Νικόλαος
Κλώνης Ιωάννης
Μπουριώτης Βασίλειος
Κατινάκης Παναγιώτης
Κίντζιος Σπυρίδων
Μηλιώνη Δήμητρα
Φλεμετάκης Εμμανουήλ
Επιστημονικό πεδίο
Γεωργικές Επιστήμες
Γεωργική Βιοτεχνολογία
Λέξεις-κλειδιά
Μεταφοράση του γλουταθείου; Τρισδιάστατη δομή; Κατευθυνόμενη μεταλλαξογένεση; Κατευθυνόμενη εξέλιξη; Φυτοφάρμακο fluorodifen; Πρωτεϊνική μηχανική; Υπεροξειδάση του γλουταθείου; Μεταλλαξογένεση κορεσμού
Χώρα
Ελλάδα
Γλώσσα
Ελληνικά
Άλλα στοιχεία
πιν., σχημ.