Η επίδραση των φυσικών αντιοξειδωτικών στην ισχαιμία και επαναιμάτωση του λεπτού εντέρου: πειραματική μελέτη

Abstract

Introduction: Intestinal ischemia and reperfusion triggers a severe oxidative stress with enhanced production of reactive oxygen species (ROS), mediates the expression of nuclear factors, inducing apoptosis and triggering lipid peroxidation. We evaluate the potential protective effect of-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) administration in minimizing lipid peroxidation and attenuating apoptosis, inhibition of expression of NF-kB, c-Jun, caspase-3 in a model of intestinal ischemia-reperfusion. Methods: thirty (30) male wistar rats, weighting 250-300g, were used divided into three groups. EGCG administrated intra-peritonealy 15 min before the induction of ischemia. Intestinal ischemia was induced for 60 min by cross-clamping the superior mesenteric artery with a vascular microclip. Intestinal MDA and MPO, TUNNEL, immunocytochemistry for NF-kB, c-Jun, caspace-3, transmission electron microscopy and light histology examinations of intestine were performed after 160 min of reperfusion. Results: apoptosis as indicated by TUNNEL was increased in I/R group compared with the sham and EGCG pretreated group. Activated caspase-3 was widely expressed in positive for NF-Kb, c-Jun in I/R group but negative in EGCG treated group. Mean MDA (nmoles/g wet weight) and MPO values (U/g) were 0.524, 0.913, 0565 and 1.8, 2.92, 1.9 in groups A,B and C respectively. Transmission electron microscopy and light histology examination revealed significant protection of small intestine from ischemia/reperfusion injury by inhibition of apoptic signal transduction pathways and reduction of lipid peroxidation.

Η ισχαιμία και επαναιμάτωση του λεπτού εντέρου προκαλεί οξειδωτικό stress με αυξημένη παραγωγή ΕΡΟ και έκφραση μεταγραφικών παραγόντων, προκαλώντας απόπτωση, και λιπιδική υπεροξείδωση. Εξετάστηκε η πιθανή προστατευτική δράση του EGCG στη μείωση της λιπιδικής υπεροξείδωσης, στη μείωση της απόπτωσης και στην αναστολή της έκφρασης των NF-kB, c-Jun και caspace-3 σε ένα μοντέλο ισχαιμίας/επαναιμάτωσης λεπτού εντέρου. Υλικά και Μέθοδος : τριάντα επίμυες τύπου Wistar, χωρισμένοι σε τρείς ομάδες. Α1: Εικονική επέμβαση (Ε/Ε), Β1: ισχαιμία/επαναιμάτωση (Ι/Ε), Γ1: I/E+ΕGCG 50mg/kg ΒΣ. H χορήγηση του EGCG έγινε 15' πριν από την εγκατάσταση της ισχαιμίας. Ισχαιμία εγκαταστάθηκε για 60 min με αποκλεισμό της ΑΜΑ και ακολούθησε επαναιμάτωση για 120 min. Έγινε προσδιορισμός της MDA, MPO, TUNEL, ανοσοϊστοχημεία για NF-kB, c-Jun, caspase-3, και έλεγχος με οπτικό μικροσκόπιο στο τέλος της επαναιμάτωσης. Αποτελέσματα: η απόπτωση όπως προσδιορίζεται από το TUNEL ήταν αυξημένη στην ομάδα Ι/Ε σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και την ομάδα που χορηγήθηκε EGCG. H caspase-3 ήταν ευρέως ενεργοποιημένη στην ομάδα Ι/Ε ενώ στην ομάδα στην ομάδα του EGCG πολύ μικρή έκφραση εμφανίστηκε. Το λεπτό έντερο χρωματίστηκε θετικά για NF-kB, c-Jun στην ομάδα Ι/Ε αλλά αρνητικά στην ομάδα του EGCG. Οι μέσες τιμές για την MDA (nmole/g w.t.):1,8, 2,92, 1,9 στις ομάδες Α1, Β1, Γ1 αντίστοιχα. Οι εξετάσεις από οπτικό μικροσκόπιο έδειξαν σοβαρές βλάβες στην ομάδα Ι/Ε και σημαντική προστασία στην ομάδα του EGCG. Συμπεράσματα : η χορήγηση EGCG προστατεύει το λεπτό έντερο από τη βλάβη ισχαιμίας/επαναιμάτωσης αναστέλλοντας την οδό της απόπτωσης και της διάδοσης του σήματος και παράλληλα προστατεύει από τη λιπιδική υπεροξείδωση.