Επίπεδα νευροτενσίνης (NT), εκλυτικής ορμόνης της κορτικοτροπίνης (CRH) και ιντερλευκίνης-33 (IL-33) στον ορό ασθενών με δερματική μαστοκυττάρωση (ΔΜ) και η επίδρασή τους στην ενεργοποίηση των ανθρωπίνων καλλιεργούμενων μαστοκυττάρων

Abstract

Objective: The goals of the present study are: a) the influence of neurotensin (NT), corticotropin releasing hormone (CRH) and interleukin-33 (IL-33) in the way with which the human cultured mast cells release substances, when they are cultured in media enhanced or not with interleukin-4 (IL-4). Moreover, b) the influence of the previous mentioned substances and of their combinations in the gene expression, intracellular synthesis and extracellular release of interleukin-31 (IL-31) from the stimulated mast cells when they are cultured in media enhanced or not with IL-4 and are sensitized or not with IgE/anti-IgE. Final goal of the present study was c) the measurement of the levels of NT, CRH and IL-33 at the serum of patients suffering from cutaneous mastocytosis (CM).Cells, subjects and methods: At the present study we used human leukemic mast cells (LAD2). They were donated from Dr. Kirshenbaum from the National Institute of health (NIH, Bethesda, MD, USA) and were obtained from a patient suffering from mast cell leukemia. LAD2 were cultured in specific flasks, in which LAD2 were placed at concentration 105/ml of culture media (StemPro-34 serum-free medium, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Recombinant human stem cell factor (rhSCF, Biovitrum, Sweden) 100 ng/ml, penicillin 1%, streptomycin 1% and glutamin 1% were added in the media. When LAD2 were stimulated with rhIL-4 (recombinant human IL-4, R&D systems, Mineapolis, MN) and were sensitized with IgE, IL-4 100 ng/ml and IgE 1 μg/ml (human IgE, EMD Millipore, San Diego, CA) were added in the media for 2 weeks and 12 hours respectively, before cultured cells were washed off with their relative media and finally stimulated with the corresponding substances for 24 hours. The substances which were used for the 24-hour stimulation of LAD2 were CRH at 10 μΜ (Sigma-Aldrich, St Louis, MO), ΝΤ 1 μM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO), IL-33 at 10 ng/ml, (R&D Sytsems, Minneapolis, MN), anti-IgE at 1 μg/ml, (Life Technologies, Carlsbad, CA) and SP at 2 μΜ, (Sigma-Aldrich, St Louis, MO), as well as their combination. The final concentrations of the substances under investigation were done in the corresponding media relatively to the condition which was studied each time. LAD2 were cultured in specific tissue culture room where CO2 was 5% and temperature 37 0C, and were used in their logarithmic phase of development. Mast cells stimulated or not with the previous mentioned substances and sensitized or not with IgE/anti-IgE in enhanced or not IL-4 media were investigated relatively to their ability to express genetically, synthesize intracellularly and release the newly described interleukin-31 (IL-31), after we proved if the investigated substances degranulate preformed substances from mast cells or if they release newly synthesized ones from them.The levels of NT, CRH and IL-33 were measured in patients’ serum suffering from CM. These patients were 20 Caucasian children and their age was 5 + 4 years with maculopapular CM (n=5), diffuse (n=4) or cutaneous mastocytoma (n=11). These children presented at the pediatric outpatient clinic of A’ Dermatologic Clinic of the University of Athens at “Andreas Syggros” Hospital, as well as the B’ Allergiologic Department of Children’s Hospital “Panagiotis and Aglaia Kyriakou” of the University of Athens. Controls were 10 Caucasian children, 4,5 + 3 years (n=10), who presented for a routine check-up at the pediatric outpatient clinic of A’ Dermatologic Clinic of “Andreas Syggros” Hospital of the University of Athens. Both patients’ and controls’ parents were informed relatively to the purpose of our study and then they signed a consent form according to the principles of Helsinki. Also, all patients’ parents completed their children’s personal history in detail. Methods which were followed were: a) β-hexosaminidase release (β-hex), so as to clarify the way mast cells release substances when they are under the influence of the investigated substances, using as positive control SP, b) lysis of LAD2 mast cells under all the different investigated conditions, using a light sensitive solution, which consisted by Buffer 10x (Cell Signaling Technology), PBS and PMSF (Cell Signaling Technology). This technique allowed the collection, under light sensitive conditions of the intracellular content of the mast cells, in order to measure the intracellular synthesis of IL-31 and its intracellular storage, c) the technique of reverse transcription followed by the quantitative polymerase chain reaction (qPCR), so as we investigate the gene expression of IL-31 from the cultured mast cells, under the pre-mentioned various conditions and d) the Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), in order we measure the levels of both the intracellular synthesis and the release of IL-31 (human IL-31, R&D Systems, Minneapolis, MN) from mast cells under all the investigated conditions. Moreover, ELISA was also used for measuring the levels of NT (human Neurotensin, NT ELISA kit, CSB-E09144h, Cusabio), CRH (human corticotropin releasing hormone, CRH ELISA Kit, CSB-E06872h, Cusabio) and IL-33 (human IL-33 ELISA Kit, EA 100585, Origene) in the serum of both patients suffering from CM and controls with similar characteristics.Results: Mast cells express the gene, synthesize intracellularly and release the newly described IL-31 when IL-33 stimulates mast cells on its own, but not in response to NT, CRH and SP. However, when NT, CRH or SP co-stimulate mast cells with IL-33, and especially when IL-33 co-stimulates mast cells with SP, all above activities of mast cells relatively to IL-31 appear increased. The increase becomes more intense when IL-4 is added in the media or mast cells are sensitized with IgE/anti-IgE, but the most intense responses appear when both IL-4 and IgE/anti-IgE co-exist, and especially at the condition at which IL-33 co-stimulates with SP the mast cells. We suggest that mast cells don’t degranulate IL-31, as we proved through our experiments that NT, CRH and IL-33 don’t degranulate one of the known pre-formed substances of mast cells, β-exosaminidase; while SP degranulates it. Levels of NT, CRH and IL-33 were not increased at patients’ with CM serum comparatively with the controls’ one. Conclusion: The exacerbation of both the symptoms of inflammatory, allergic and autoimmune diseases, with pruritus being the main one, and their prognosis, and especially under emotional and physical stress, may be explained through the increase of the levels of IL-31 when mast cells are influenced by substances from their microenvironment, in which IL-33, CRH, NT and SP are increased, according to the bibliography. Mast cells are among the most important cells of the above mentioned diseases, as they induce and enhance both the innate and the adaptive immune system, through their numerous and various receptors or mediators, which among others, make mast cells able to recruit other types of cells. Recruitment of other cecll types from mast cells leads extra mediators to be released and further interactions with mast cells happen, immunologically or non-immunollogically mediated. To the best of our knowledge, our study is the first which proves that the newly described IL-31, important cytokine to inflammatory, allergic and autoimmune diseases, is expressed at the gene level, synthesized intracellularly and released from mast cells, when IL-33, CRH and NT stimulate mast cells. The above mentioned activities of mast cells relatively to the IL-31 are enhanced when mast cells response with IgE-mediated mechanisms or IL-4 exists in their microenvironment or even increased activities appear when all the above conditions co-exist and the person is emotionally or physically stressed. IL-4 is released from recruited white cells; but is also shown that released by mast cells stimulates further the production of leukotrienes from mast cells, with positive feedback to themand thus their advanced reactive hyperplasia. IL-4 promotes the increased production of IgE, enhancing again the effects of mast cells. Levels of NT, CRH and IL-33 in the serum of patients with CM serum are not increased comparing to the controls serum. Given that levels of IL-31 are not increased in serum of patients with CM, according to a publication, the lack of any increase in serum NT, CRH or IL-33 suggests that some relationship may be importnant locally in the skin. However, the levels of the same substances may be increased at the serum of SM patients, as levels of IL-31 are increased at them, according to the bibliography.Our results show that mast cells are multipotent and can be maximally stimulated by a combination of triggers. It is, therefore, necessary to develop effective inhibitors of the synthesis and release of their proinflammatory mediators. Recent example consists the higly promising treatment of the inhibitors of IL-4 (dupilumab) at diseases, such as atopic dermatitis, which are characterized both from majority of mast cells and IL-31 consists index of their severity and of the intense of the pruritus which appears to these.

Σκοπός. Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε με σκοπό τη διερεύνηση: α) της επίδρασης της νευροτενσίνης (ΝΤ), της εκλυτικής ορμόνης της κορτικοτροπίνης (CRH) και της ιντερλευκίνης-33 (IL-33) στον τρόπο με τον οποίο τα ανθρώπινα καλλιεργούμενα μαστοκυττάρα απελευθερώνουν ουσίες, όταν καλλιεργηθούν σε υλικό εμπλουτισμένο ή όχι με ιντερλευκίνη-4 (IL-4). Επίσης, β) την επίδραση των παραπάνω ουσιών και των συνδυασμών τους στη γονιδιακή έκφραση, ενδοκυττάρια σύνθεση και εξωκυττάρια απελευθέρωση της ιντερλευκίνης-31 (IL-31) από τα διεγερμένα μαστοκύτταρα όταν καλλιεργούνται σε υλικό εμπλουτισμένο ή όχι με ΙL-4 και ευαισθητοποιηθούν ή όχι με IgE/anti-IgE. Τελευταίος στόχος της παρούσας μελέτης αποτέλεσε γ) η μέτρηση των επιπέδων της NT, της CRH και της IL-33 στον ορό ασθενών με δερματική μαστοκυττάρωση (ΔΜ).Χαρακτηριστικά κυττάρων και ατόμων τα οποία μελετήθηκαν και μέθοδοι. Για την παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκε κυτταρική σειρά ανθρώπινων λευχαιμικών μαστοκυττάρων (human LAD2 cells), η οποία χορηγήθηκε δωρεάν από το Δρ Kirshenbaum του Εθνικού Ινστιτούτου Υγείας (National Institute of Health,ΝΙΗ, Bethesda, MD, USA), από ασθενή ο οποίος έπασχε από λευχαιμία της σειράς των μαστοκυττάρων. Τα LAD2 καλλιεργήθηκαν σε ειδικές καλλιεργητικές φλάσκες, όπου τοποθετούνταν σε συγκέντρωση 105/ml θρεπτικού υλικού (StemPro-34 serum-free medium, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Στην καλλιέργεια προστίθεντο 100 ng/ml ανασυνδυασμένου ανθρώπινου παράγοντα βλαστικών κυττάρων (recombinant human stem cell factor, rhSCF, Biovitrum, Sweden), 1% πενικιλλίνη, 1% στρεπτομυκίνη και 1% γλουταμίνη. Στις συνθήκες στις οποίες μελετήθηκε η συμπεριφορά των LAD2 όταν αυτά ευαισθητοποιήθηκαν με recombinant human IL-4, (rhIL-4, R&D systems, Mineapolis, MN) ή/και IgE, το καλλιεργούμενο θρεπτικό τους υλικού εμπλουτίστηκε με 100 ng/ml IL-4 για 2 εβδομάδες ή/και με 1 μg/ml IgE (human IgE, EMD Millipore, San Diego, CA) για 12 ώρες αντίστοιχα, προτού ξεπλυθούν με το αντίστοιχο ανά κατάσταση καλλιεργούμενο θρεπτικό υλικό και διεγερθούν για 24 ώρες με την ανάλογη ανά συνθήκη ουσία. Οι ουσίες, οι οποίες χρησιμοποιήθηκαν για την 24ωρη διέγερση των LAD2, ήταν η CRH 10 μΜ (Sigma-Aldrich, St Louis, MO), η ΝΤ 1 μM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO), η IL-33 10 ng/ml, (R&D Sytsems, Minneapolis, MN), το anti-IgE 1 μg/ml, (Life Technologies, Carlsbad, CA) και η SP 2μΜ, (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) καθώς και συνδυασμός αυτών. Οι τελικές συγκεντρώσεις στις οποίες χρησιμοποιήθηκαν οι τελευταίες ουσίες έγιναν στο αντίστοιχο για κάθε συνθήκη καλλιεργούμενο θρεπτικό υλικό, προτού χρησιμοποιηθούν, ενώ τα LAD2 αναπτύχθηκαν σε επωαστικό θάλαμο συγκέντρωσης 5% CO2 στους 37οC και χρησιμοποιήθηκαν κατά τη λογαριθμική φάση ανάπτυξής τους. Τα διεγερμένα ή μη με τις προαναφερόμενες ουσίες και ευαισθητοποίημένα ή όχι με IgE/anti-IgE μαστοκύτταρα μελετήθηκαν σε εμπλουτισμένο ή όχι με IL-4 καλλιεργητικό υλικό ως προς την ικανότητά τους να εκφράζουν γονιδιακά, να συνθέτουν ενδοκυττάρια και να απελευθερώνουν εξωκυττάρια τη νεοπεριγραφείσα ιντερλευκίνη-31 (IL-31), αφού πρώτα αποδείχθηκε αν οι μελετούμενες ουσίες αποκοκκιώνουν προσχηματισμένες ουσίες των μαστοκυττάρων ή απελευθερώνουν νεοσυντιθέμενες ουσίες από αυτά.Επίσης, για τη μέτρηση των επιπέδων της NT, της CRH και της IL-33 στον ορό ασθενών με ΔΜ, συμμετείχαν 20 παιδιά, Καυκάσιας φυλής, μέσης ηλικίας 5 + 4 έτη με κηλιδοβλατιδώδη (n=5), διάχυτη ΔΜ (n=4) ή μονήρες δερματικό μαστοκυττάρωμα (n=11), τα οποία παρουσιάστηκαν στο Παιδοδερματολογικό Ιατρείο της Α’ Πανεπιστημιακής Δερματολογικής Κλινικής του Πανεπιστημίου Αθηνών με έδρα το νοσοκομείο Ανδρέας Συγγρός καθώς και στη Β’ Μονάδα Αλλεργιολογίας και Κλινικής Ανοσολογίας του νοσοκομείου Παίδων Παναγιώτη και Αγλαίας Κυριακού του Πανεπιστημίου Αθηνών. Οι υγιείς μάρτυρες ήταν 10 παιδιά, Καυκάσιας φυλής, μέσης ηλικίας 4.5 + 3 ετών (n= 10), τα οποία προέρχονταν από το Παιδοδερματολογικό Ιατρείο της Α’ Πανεπιστημιακής Δερματολογικής Κλινικής του Πανεπιστημίου Αθηνών με έδρα το νοσοκομείο Ανδρέας Συγγρός και τα οποία προσήλθαν για άλλες δερματολογικές παθήσεις. Στους κηδεμόνες τόσο των υγιών όσο και των πασχόντων από ΔΜ παιδιών έγινε εκτενής αναφορά σχετικά με το σκοπό και τα σημεία της μελέτης και στο τέλος όλοι οι κηδεμόνες υπέγραψαν έντυπο συγκατάθεσης σύμφωνα με τη Διακήρυξη των Αρχών του Helsinki, όπως επίσης, ο κάθε κηδεμόνας συμπλήρωσε ένα ερωτηματολόγιο, το οποίο αφορούσε στο ατομικό ιστορικό των πασχόντων από ΔΜ παιδιών. Για τους παραπάνω σκοπούς, ακολουθήθηκαν οι παρακάτω μέθοδοι: α) απελευθέρωση της β-εξοζαμινιδάσης (β-hex), ώστε να μελετηθεί ο τρόπος με τον οποίο τα μαστοκύτταρα απελευθερώνουν τις ουσίες τους υπό την επίδραση των μελετούμενων ουσιών, έχοντας ως μάρτυρα τη SP, β) η λύση των LAD2 μαστοκυττάρων μετά από τις παραπάνω διαφορετικές συνθήκες, με φωτοευαίσθητο διάλυμα, το οποίο αποτελούνταν από ρυθμιστικό διάλυμα (Buffer 10x, Cell Signaling Technology), PBS και PMSF (Cell Signaling Technology). Με αυτήν την τεχνική συλλέχθηκε, σε συνθήκες φωτοπροστασίας, το ενδοκυττάριο υλικό των μαστοκυττάρων, προκειμένου να μετρηθεί η ενδοκυττάρια σύνθεση και αποθήκευση της IL-31, γ) η μέθοδος της αντίστροφης μεταγραφής ακολουθούμενης από την ποσοτική αλυσιδωτή αντιδραση της πολυμεράσης (quantitave PCR, qPCR), ώστε να μελετηθεί η δυνατότητα των καλλιεργούμενων μαστοκυττάρων αν εκφράζουν την IL-31 γονιδιακά, υπό την επίδραση των παραπάνω ουσιών και στις προαναφερόμενες συνθήκες και δ) η ενζυμοσύνδετη ανοσοπροσροφητική μέθοδος (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA), προκειμένου να μελετηθεί η ενδoκυττάρια σύνθεση και η εξωκυττάρια απελευθέρωση της IL-31 (human IL-31, R&D Systems, Minneapolis, MN) από τα μαστοκύτταρα κάτω από όλες τις προαναφερόμενες συνθήκες. Επίσης, η ELISA χρησιμοποιήθηκε και για τη μέτρηση των επιπέδων της NT (human Neurotensin, NT ELISA kit, CSB-E09144h, Cusabio), της CRH (human corticotropin releasing hormone, CRH ELISA Kit, CSB-E06872h, Cusabio) και της IL-33 (human IL-33 ELISA Kit, EA 100585, Origene) στον ορό τόσο πασχόντων από ΔΜ όσο και ανάλογων χαρακτηριστικών μαρτύρων.Αποτελέσματα. Τα μαστοκύτταρα εκφράζουν γονιδιακά, συνθέτουν ενδοκυττάρια και απελευθερώνουν τη νεοσυντιθέμενη IL-31 όταν σε αυτά επιδράσει η IL-33 μεμονωμένα, αλλά όχι η NT, η CRH και η SP. Ωστόσο, σε συνδιέγερση της NT ή της CRH ή της SP με την IL-33, και ιδιαίτερα όταν συνδιεγερθεί η SP με την IL-33, οι παραπάνω δραστηριότητες των μαστοκυττάρων σχετικά με την IL-31 παρατηρούνατι αυξημένες. Η γονιδιακή έκφραση, η ενδοκυττάρια σύνθεση και η εξωκυττάρια απελευθέρωση της IL-31 από τα μαστοκύτταρα ευνοείται εξαιρετικά όταν το καλλιεργητικό υλικό εμπλουτιστεί με την IL-4 ή όταν τα μαστοκύτταρα ευαισθητοποιηθούν με IgE και έπειτα διεγερθούν με anti-IgE. Αυτά τα αποτελέσματα υπεραυξάνονται, όταν τα ευαισθητοποιημένα με IgE και συνδιεγερμένα με anti-IgE μαστοκύτταρα καλλιεργηθούν, ταυτόχρονα, και σε καλλιεργητικό υλικό εμπλουτισμένο με IL-4, ξανά με ιδιαίτερα αυξημένα αποτελέσματα στη συνθήκη κατά την οποία η IL-33 αλληλεπιδράσει με την SP. Υποστηρίξαμε ότι τα μαστοκύτταρα δεν αποκοκκιώνουν την IL-31, λόγω του ότι στα πειράματα αποδείχθηκε ότι η NT, η CRH και η IL-33 δεν προκαλούν την αποκοκκίωση της γνωστής προσχηματισμένης ουσίας των μαστοκυττάρων, της β-εξοζαμινιδάσης, ενώ αντίθετα η SP προκαλεί την αποκοκκίωσή της τελευταίας. Στον ορό των πασχόντων από ΔΜ δεν παρατηρήθηκαν αυξημένα τα επίπεδα της NT, της CRH και της IL-33, συγκριτικά με τους μάρτυρες.Συμπεράσματα. Η επιδείνωση τόσο ως προς τη συμπτωματολογία φλεγμονωδών, αλλεργικών και αυτοανόσων νοσημάτων, με κυριότερο το σύμπτωμα του κνησμού, όσο και ως προς την πρόγνωσή τους, και κυρίως κάτω από καταστάσεις συναισθηματικού και σωματικού στρες, μπορεί να εξηγηθεί με την αύξηση των επιπέδων της IL-31 κάτω από την επίδραση την οποία δέχονται τα μαστοκύτταρα από το περιβάλλον τους, στο οποίο η IL-33, η CRH, η NT και η SP είναι αυξημένα στα παραπάνω νοσήματα, σύμφωνα με τη βιβλιογραφία. Τα μαστοκύτταρα διαδραματίζουν ουσιαστικό ρόλο στις προαναφερόμενες καταστάσεις, καθώς μπορούν να επάγουν και να ενισχύουν τόσο την ενδογενή όσο και την επίκτητη ανοσία, μέσω των πολλαπλών και ποικίλλων υποδοχέων που διαθέτουν και τα καθιστούν ικανά ως κύτταρα να συμμετέχουν, μεταξύ άλλων, και στη στρατολόγηση άλλων κυττάρων. Με τη στρατολόγηση, επιπλέον, κυττάρων απελευθερώνονται περισσότεροι μεσολαβητές και επομένως, συμβαίνουν περαιτέρω αλληλεπιδράσεις με τα μαστοκύτταρα, ανοσολογικά ή μη μεσολαβούμενες. Η μελέτη μας είναι μοναδική, γιατί είναι η πρώτη φορά που αποδεικνύεται ότι η IL-31, νεοπεριγραφείσα βασική κυτταροκίνη σε φλεγμονώδεις, αλλεργικές και αυτοάνοσες καταστάσεις, όπως προκύπτει από τη βιβλιογραφία, εκφράζεται γονιδιακά, συντίθεται ενδοκυττάρια και απελευθερώνεται εξωκυττάρια από τα μαστοκύτταρα όταν σε αυτά επιδράσουν ουσίες, όπως η IL-33, η CRH και η NT. Οι παραπάνω δράσεις των μαστοκυττάρων ως προς την IL-31 ενισχύονται όταν τα μαστοκύτταρα απαντήσουν με IgE-μεσολαβούμενους μηχανισμούς ή στην παρουσία της IL-4, αλλά μεγιστοποιούνται όταν τα μαστοκύτταρα απαντήσουν με IgE-μεσολαβούμενο μηχανισμό σε περιβάλλον στο οποίο, την ίδια στιγμή, υπάρχει η IL-4 και το άτομο φορτίζεται συναισθηματικά ή σωματικά. Η IL-4, η οποία μπορεί να απελευθερωθεί από τα μαστοκύτταρα, διεγείρει την επιπλέον παραγωγή των λευκοτριενιών από αυτά, με θετική ανατροφοδότηση και επομένως την περαιτέρω αντιδραστική υπερπλασία των μαστοκυττάρων. αλλά, επίσης, προωθεί τη μεγαλύτερη παραγωγή της IgE, πολλαπλασιάζοντας τα όποια αποτελέσματα των μαστοκυττάρων. H IL-4, όμως, απελευθερώνεται και από τα στρατολογημένα λευκά κύτταρα, μιας και τα Th2 κύτταρα θεωρούνται η βασική πηγή παραγωγής της IL-4 βιβλιογραφικά. Επίσης, στη μελέτη μας αποδείχθηκε, για πρώτη φορά στη βιβλιογραφία, ότι τα επίπεδα της NT, της CRH και της IL-33 στον ορό πασχόντων από ΔΜ δεν παρουσιάζονται αυξημένα συγκριτικά με αυτά των μαρτύρων. Ωστόσο, από τη βιβλιογραφία προκύπτει ότι και τα επίπεδα της IL-31 στον ορό ατόμων με ΔΜ δε μετρώνται αυξημένα, αποδεικνύοντας επιπρόσθετα τη στενή συσχέτιση μεταξύ των μελετούμενων ουσιών, NT, CRH, IL-33 με την IL-31, σε καταστάσεις στις οποίες τα μαστοκύτταρα κατέχουν κεντρικό ρόλο, όπως στη ΔΜ. Παρόλα αυτά τα επίπεδα των μελετούμενων ουσιών σε άτομα με συστηματική μαστοκυττάρωση θα μπορούσαν να είναι διαφορετικά, εφόσον, σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, τα επίπεδα της IL-31 είναι αυξημένα στον ορό αυτών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα μαστοκύτταρα είναι πολυδύναμα και ενεργοποιούνται μέγιστα από συνδυασμό ερεθισμάτων. Είναι, επομένως, απαραίτητο να βρεθεί αποτελεσματικός τρόπος για να ανασταλλούν η σύνθεση και έκκριση προφλεγμονωδών διαβιβαστών. Πρόσφατο παράδειγμα αποτελεί η πολλά υποσχόμενη θεραπεία αναστολέων της IL-4 (ντουπιλουμάμπη), σε νοσήματα, όπως η ατοπική δερματίτιδα, τα οποία αφενός χαρακτήριζονται από μεγάλο αριθμό μαστοκυττάρων και αφετέρου η IL-31 αποτελεί σε αυτά τόσο προγνωστικό δείκτη τους, όσο και δείκτη έντασης του κνησμού που τα χαρακτηρίζει.