Γενετικές και επιγενετικές αλλαγές στο μονοπάτι σηματοδότησης p13k / akt στον καρκίνο της ουροδόχου κύστεως

Abstract

The purpose of this PhD thesis was to examine the involvement of specific components of the PI3K/AKT pathway in urinary bladder cancer. Samples from sixty-five tumors and thirteen normal bladder tissues were collected. Genomic DNA isolation from snap-frozen and paraffin-embedded laser-microdissected tissues was followed by Sanger sequencing, whereas total RNA was purified for use in RT-PCR analyses. Immunohistochemistry was carried out on sections of paraffin-embedded biopsy material.Three pathogenic mutations (two missense and one frameshift) were identified in exon 20 of PIK3CA {c.3140A>G (p.His1047Arg), c.[3172A>T(;)3174C>T] (p.lle1058Phe), c.3203dupA (p.Asn1068Lysfs*5)} after laser capture microdissection, whereas PTEN mRNA expression was found to be downregulated in bladder cancer tissues compared to normal bladder urothelium. Upregulation of cytoplasmic and nuclear p-AKT expression was detected in low grade tumors, whereas in muscle invasive tumors, p-AKT was shown to be downregulated and confined to the cytoplasm. PTEN expression was weak and mainly cytoplasmic in superficial tumors, but stronger and nuclear in the muscle invasive tumors.In conclusion, PI3K/AKT pathway activation is involved in bladder cancer initiation and progression. In this context, PIK3CA, p-AKT and nuclear PTEN could be used along with other biomarkers for prognostic purposes and for the selection of appropriate therapy in the clinical management of bladder cancer.

Σκοπός αυτής της διδακτορικής διατριβής ήταν να εξετάσει τη πιθανή εμπλοκή του μοριακού μονοπατιού PI3K/AKT στο καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Πραγματοποιήθηκε λήψη δειγμάτων από εξήντα πέντε όγκους κύστης και από δεκατρία φυσιολογικούς ιστούς ουροθηλίου της κύστης. Πραγματοποιήθηκε απομόνωση DNA, ακολουθία Sanger, εξέταση RNA, RT-PCR, καθώς και ανοσοιστοχημεία. Διαπιστώθηκαν τρεις παθογενετικές μεταλλάξεις (2 missense, 1 frameshift) στο εξόνιο 20 του PIK3CA {c.3140A>G (p.His1047Arg), c.[3172A>T(;)3174C>T] (p.lle1058Phe), c.3203dupA (p.Asn1068Lysfs*5). Η έκφραση του PTEN mRNA διαπιστώθηκε ότι ήταν μειωμένη στο καρκίνο της κύστης σε σύγκριση με το φυσιολογικό ουροθήλιο της κύστης. Η έκφραση του p-AKT βρέθηκε αυξημένη στο κυτταρόπλασμα και το πυρήνα σε όγκους επιφανειακούς (μη μυοδηιθητικούς) σε αντίθεση με τους μυοδηιθητικούς όγκους όπου η έκφραση του p-AKT βρέθηκε μειωμένη και περιορισμένη κυρίως στο κυτταρόπλασμα. Η έκφραση του PTEN διαπιστώθηκε ότι ήταν ασθενής και κυρίως κυτταροπλασματική στους επιφανειακούς όγκους (μη μυοδηιθητικούς), ενώ στους μυοδιηθητικούς ήταν ισχυρότερη και κυρίως πυρηνική.Συμπερασματικά, το μοριακό μονοπάτι PI3K/AKT εμπλέκεται στην εξέλιξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και η μέτρηση μορίων του (PIK3CA, p-AKT, PTEN) σε συνδυασμό και με άλλους βιοδείκτες θα μπορύσε να έχει προγνωστικό και θεραπευτικό ρόλο.