Μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα κλινικά, αιματολογικά, ιστομορφολογικά και γενετικά ευρήματα

Abstract

Myelodysplastic syndromes (MDS) are clonal disorders of haemopoietic stem cells, characterized by ineffective haemopoiesis and increased probability of transformation to acute leukemia. MDS cells present genetic instability and multiple chromosomal abnormalities. Many genes are disturbed or dysregulated so as an abnormal cell phenotype and function is expressed. C3ORF9 is a gene isolated from an MDS cDNA library and codes for a putative protein of 46.2kDa called X010. We studied the expression of C3ORF9 in various (MDS) syndromes to investigate possible involvement of the gene to the pathophysiology of MDS. 81 patients, aged 33-85 years (median 69) and 17 healthy individual aged 33-85 years (median 71), were involved in our study. RNA extraction was performed from bone marrow aspirates and from isolated CD34 + bone marrow cells. Gene expression was estimated by quantitative real time PCR. C3ORF9 expression was found downregulated in patients with CMML compared to the normal controls (p<0.01). There was no difference between RARS and the normals (p=0.1), while increased expression was found in RA, RAEB and RAEB-T compared to the normals (p< 0.01 for all). No mutations or polymorphism of the gene were detected in our population. CD34+ cells expressed higher levels of C3ORF9 (p<0.01) in patients compared to normals. The expression of the gene correlated to the number of CD34+ cells in RAEB and RAEB-T (r 2 =0.64). In conclusion the increased C3ORF9 expression was possibly due to different gene regulation in these patients and /or to the increased number of CD34+ cells.

Τα μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα (MDS) αποτελούν μια ετερογενή ομάδα κλωνικών αιμοποιητικών διαταραχών, που χαρακτηρίζονται από αναποτελεσματική αιμοποίηση, περιφερικές κυτταροπενίες, δυσπλαστικές αλλοιώσεις στα αιμοποιητικά κύτταρα του μυελού των οστών και αυξημένη πιθανότητα εκτροπής σε οξεία μυελογενή λευχαιμία. Τα MDS κύτταρα παρουσιάζουν σταδιακά γονιδιακή αστάθεια, κυτταρογεννετικές ανωμαλίες και μοριακές μεταλλάξεις, που οδηγούν σε μείωση της απόπτωσης και της διαφοροποίησης των αρχέγονων αιμοποιητικών κυττάρων, και ευνοούν τον ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό και τον λευχαιμικό μετασχηματισμό των κυττάρων . Το γονίδιο C3orf9 απομονώθηκε από cDNA βιβλιοθήκης μυελού οστών πασχόντων από MDS και κωδικοποιεί την υποθετική πρωτεΐνη X010, μοριακού βάρους 46189 Da.Η Χ010 περιέχεται στα μικροσωμάτια και έχει ομολογία με μεμβρανικές πρωτεΐνες αλλά η ακριβής δράση της δεν είναι γνωστή. Μελετήσαμε την έκφραση C3RF9 στα διάφορα σύνδρομα (MD) για να ερευνήσουμε την πιθανή συμμετοχή του γονιδίου στην παθοφυσιολογία των MD. Στην μελέτη περιλήφθηκαν 81 ασθενείς πάσχοντες από πρωτοπαθή MDS, 30 γυναίκες, και 51 άνδρες ηλικίας 33-85 (διάμεση ηλικία 69 έτη) καθώς και 17 υγιείς εθελοντές (9 άνδρες και 8 γυναίκες, διάμεση ηλικία 71 έτη, εύρος 33-85), που νοσηλεύτηκαν στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Λάρισας. Στην μελέτη μας δεν συμπεριλήφθηκαν ασθενείς με δευτεροπαθή MDS. Έγινε εξαγωγή RNA και DNA σύμφωνα με κλασσικές μεθόδους από ολικό αίμα και μυελό των οστών , τα νουκλεϊνικά οξέα φυλάχτηκαν στους –80ο C και 4ο C αντίστοιχα. Η έκφραση γονιδίων υπολογίστηκε έγινε RT-PCR. Βρέθηκε ότι στο σύνολο των ασθενών με MDS η έκφραση του C3orf9 ήταν αυξημένη ,σε σύγκριση με τους υγιείς(p<0.01). Στις επί μέρους κατηγορίες φαίνεται, ότι υπάρχει μεγάλη διακύμανση στην έκφραση. Συγκεκριμένα στους ασθενείς με CMML η έκφραση ήταν μειωμένη σε σχέση με τους υγιείς(p<0.01). Στους ασθενείς με RARS η έκφραση δεν διέφερε στατιστικά σημαντικά από τους υγιείς(p=0.1).Στους ασθενείς με RA,RAEB και RAEB-t η έκφραση ήταν σημαντικά αυξημένη σε σχέση με του υγιείς(p<0.01 για όλες τις κατηγορίες). Η μεγαλύτερη έκφραση εμφανίστηκε στην κατηγορία των RAEB(250±30%).Διαπιστώσαμε, ότι τα CD34+ των MDS έχουν ισχυρότερη έκφραση του C3orf9 σε σχέση με τα φυσιολογικά άτομα.Το γεγονός, ότι η έκφραση στους RARS είναι παρόμοια με τους υγιείς ερμηνεύεται από το ότι τα CD34+ κύτταρα δεν είναι αυξημένα στους RARS το αντίστοιχο ισχύει και για τους ασθενείς με RA,RAEB,RAEB-T. Αυτό όμως δεν ερμηνεύει το γεγονός, ότι στους CMML είναι μειωμένη η έκφραση.Αξιοσημειωτο είναι ότι καμία μετάλλαξη ή πολυμορφισμός του γονιδίου δεν ανιχνεύθηκε στον πληθυσμό μας.