Μελέτη των μηχανισμών δράσης της κυκλοσπορίνης σε καλλιέργειες περιφερικών λεμφοκυττάρων και στο περιφερικό αίμα ασθενών με ψωρίαση

Abstract

Cyclosporine A (CsA) has been used therapeutically as immunosupressive agent in several autoimmune diseases. The initial purpose of this study was to investigate the in vitro effect of cyclosporine in peripheral lymphocyte cultures, with an emphasis on the proliferation of peripheral lymphocytes and isolated Β lymphocytes as well as on the release and production of soluble molecules such as sCD23, slL-2R and immunoglobulin IgM. Additionally, the in vivo effect of CsA was investigated in corresponding immunological parametes of psoriasic patients and for comparative reasons in a group of healthy subjects. The conditions of release and serum levels of slL-2R were assessed since elevated slL-2R levels are indicative for T-cell activation, lnterleukin-2 is produced by activated Τ lymphocytes and exerts its biological activity by binding to a high affinity receptor complex on the surface of Τ and Β lymphocytes. The soluble form of the receptor has been shown to be released by human activated Τ and Β lymphocytes in vitro and it has been suggested that slL-2R binds circulating IL-2. The conditions of release of the soluble form of the CD23 antigen (sCD23), were also investigated since this molecule has been shown to induce Β cell activation and differentiation. slCAM-1 is the soluble form of ICAM-1, which is known to be the ligand of LFA-1 (lymphocyte function associate antigen). Since high levels of slCAM-1 have been reported in patients with skin diseases, slCAM-1 was thought to be a proper marker in the present study and its levels were measured in the serum of psoriatic patients. The same immunological factors were investigated in the serum of psoriasic patients that undergo CsA treatment, as well as the levels of IL-2 and IL-12, the levels of immunoglobulins, complement factors and neopterin (T-cell and macrophage activation marker). Moreover, the subpopulations of Β and Τ lymphocytes (activated or not) and natural killer cells (NK), were identified in the basis of their cellsurfase markers. The main purpose of these experiments was the comparison of the activation markers in samples taken before the administration of CsA, and 15 days, 3, 6 and 12 months after the initiation of CsA therapy. The same activation markers were measured in samples taken from healthy subjects considered as a set, as far as concerns the age and the sex of the patients. The most important findings of this study were the following: 1. The in vitro study demonstrated that cyclosporine, can under the experimental conditions used, either suppress signals for proliferation and activation of lymphocytes or upregulate certain lymphocyte functions...

Η CsA έχει χρησιμοποιηθεί θεραπευτικά ως ανοσοκατασταλτικός παράγοντας σε διάφορα αυτοάνοσα νοσήματα. Σκοπός της μελέτης αυτής ήταν η εκτίμηση των επιδράσεων της CsA σε διάφορες ανοσολογικές παραμέτρους in vitro και σε ασθενείς με ψωρίαση. Αρχικά μελετήθηκε η in vitro δράση της CsA σε καλλιέργειες περιφερικών λεμφοκυττάρων, με ιδιαίτερη έμφαση στον πολλαπλασιασμό περιφερικών λεμφοκυττάρων και απομονωμένων Β λεμφοκυττάρων, όπως και απελευθέρωση και παραγωγή διαλυτών ανοσολογικών μορίων όπως sCD23, slL-2R και της ανοσοσφαιρίνης IgM. Ακολούθως μελετήθηκε η in vivo επίδραση της CsA σε αντίστοιχες ανοσολογικές παραμέτρους ασθενών με διαγνωσμένη ψωρίαση, ενώ για συγκριτικούς λόγους μελετήθηκαν οι ίδιες παράμετροι και σε μία ομάδα φυσιολογικών μαρτύρων. Ένας από τους ανοσολογικούς παράγοντες που ερευνήθηκαν σαν ουσία της οποίας τα υψηλά επίπεδα είναι ενδεικτικά υπερ-λειτουργίας Τ-λεμφοκυττάρων είναι ο διαλυτός υποδοχέας της IL-2. Η IL-2 παράγεται από ενεργοποιημένα λεμφοκύτταρα και εξασκεί τη βιολογική της δράση με την δέσμευση της σε έναν υψηλής συγγένειας υποδοχέα (IL-2R) στην επιφάνεια των λεμφοκυττάρων. Η διαλυτή μορφή του υποδοχέα (slL-2R) απελευθερώνεται από ανθρώπινα ενεργοποιημένα λεμφοκύτταρα in vitro και έχει προταθεί ότι η ύπαρξη του δεσμεύει την Ιί-2που κυκλοφορεί στην περιφέρεια. Ο δεύτερος παράγοντας που μελετήθηκε ήταν η διαλυτή μορφή (25-27 kD) του CD23 αντιγόνου (sCD23), το οποίο αποτελεί παράγοντα ενεργοποίησης και διαφοροποίησης των Β λεμφοκυττάρων. Μετρήθηκαν επίσης τα επίπεδα του slCAM-1, το οποίο αποτελεί την διαλυτή μορφή του ICAM-1, που ως γνωστό θεωρείται το συνδεόμενο μόριο του LFA-1 (lymphocyte function associated antigen). Υψηλά επίπεδα sICAM-1 έχουν αναφερθεί σε ασθενείς με δερματικές παθήσεις και γΓαυτόν το λόγο κρίθηκε σαν κατάλληλος δείκτης για την παρούσα μελέτη. Επιπλέον, μελετήθηκαν οι ίδιες ανοσολογικές παράμετροι στους ορούς ασθενών με ψωρίαση, οι οποίοι υποβάλλονταν σε θεραπεία με CsA, ενώ παράλληλα προσδιορίστηκαν τα επίπεδα των ιντερλευκινών IL-2, IL-12, της νεοπτερίνης (δείκτης ενεργοποίησης Τ λεμφοκυττάρων και μακροφάγων), των επιπέδων των ανοσοσφαιρινών, και των παραγόντων συμπληρώματος, στον ορό αυτών των ασθενών. Ο κύριος σκοπός αυτής της φάσης ήταν να συγκριθούν αυτοί οι δείκτες ενεργοποίησης σε δείγματα που ελήφθησαν πριν από τη χορήγηση CsA, και 15 ημέρες 3, 6 και 12 μήνες μετά την έναρξη χορήγησης της ανοσοκατασταλτικής θεραπείας. Οι ίδιοι δείκτες ενεργοποίησης μετρήθηκαν σε δείγματα που ελήφθησαν από φυσιολογικούς δότες, διασταυρωμένους σαν σύνολο ως προς την ηλικία και το φύλο με τους ασθενείς. Τα πιο χαρακτηριστικά ευρήματα της μελέτης ήταν τα εξής: Η in vitro μελέτη έδειξε πως η CsA μπορεί να αναστείλει σήματα που οδηγούν στην ενεργοποίηση και στον πολλαπλασιασμό λεμφοκυττάρων ή να αυξήσει συγκεκριμένες λειτουργίες των λεμφοκυττάρων. Συγκεκριμένα, η CsA ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό περιφερικών λεμφοκυττάρων και την απελευθέρωση SIL-2R μετά από ενεργοποίηση με ιονοφόρο ασβεστίου (ιονομυκίνη). Επιπλέον, η CsA ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό προενεργοποιημένων Β λεμφοκυττάρων τα οποία επανακαλλιεργούνταν παρουσία ή απουσία κυτταροκινών...