Μελέτη της έκφρασης της τελομεράσης με ανοσοϊστοχημικές και μοριακές τεχνικές καθώς και σύγκριση αυτής με άλλους καρκινικούς - προγνωστικούς δείκτες στα κακοήθη νεοπλάσματα του μαστού του σκύλου

Abstract

DogTERT expression was investigated in malignant and normal mammary tissues using immunohistochemistry and RT-PCR. The antibody RCK-hTERT was used for the first time to detect canine TERT protein and its subcellular localization. TERT expression was also compared with histologic type and grade of the tumors, as well as disease free and overall survival of the patients. Well established tumors markers such as PCNA, ki67, p53 and caspase-3 were also investigated for possible correlation with TERT expression. Using the widely applied antibody NCL-hTERT, dogTERT protein was identified in 94% of the tumors and 50% of the adjacent normal tissues. Recent studies on specificity of this antibody showed that it does not actually recognizes TERT. Using the highly specific anti-TERT antibody (RCK-hTERT) for the first time, dogTERT protein was identified in 92% of the tumors, 52% of the adjacent normal tissues and in none of normal mammary tissues. DogTERT mRNA was identified in 96% of the malignant tissues, 88% of the adjacent to the tumor normal tissues and 50% of the healthy tissues. No statistically significant correlation was found between TERT expression and its intracellular localization patterns with histological type, tumor grade, disease free and overall survival. Correlation of TERT expression with other tumor markers was also out of statistical significance. In this study, we demonstrated that TERT is highly expressed not only in canine mammary tumors but also in their adjacent normal mammary tissues. This finding supports the notion that TERT is a marker of highly proliferating cells but cannot serve as a tumor marker for canine mammary cancer.

Αντικείμενο της διατριβής αυτής ήταν η μελέτη της έκφρασης τόσο της πρωτεΐνης όσο και του γονιδίου TERT με ανοσοϊστοχημικές και μοριακές τεχνικές, αντίστοιχα, σε καρκινικούς και παρακείμενους μαστικούς αδένες του σκύλου. Επιπλέον διερευνήθηκε η σχέση της TERT με τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά των όγκων καθώς και με άλλους καρκινικούς-προγνωστικούς δείκτες όπως το PCNA, το ki67, η p53 και η κασπάση-3. Για την πραγματοποίηση της μελέτης συλλέχθηκαν δείγματα νεοπλασματικών ιστών από 50 θηλυκούς σκύλους με κακοήθη νεοπλάσματα στο μαστικό αδένα. Από τα περιστατικά αυτά συλλέγονταν επίσης δείγματα ιστού από παρακείμενο μαστικό αδένα χωρίς ορατά υπερπλαστικά σημεία. Χρησιμοποιώντας το αντίσωμα NCL-hTERT η πρωτεΐνη TERT ανιχνεύθηκε στο 94% των νεοπλασματικών ιστών και στο 60% των παρακείμενων μαστικών αδένων. Η αξιοπιστία όμως του αντισώματος αυτού τα τελευταία χρόνια βρέθηκε να αμφισβητείται. Για το λόγο αυτό χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά σε ιστούς σκύλου το πλέον ειδικό αντίσωμα RCK- hTERT. Mε το αντίσωμα αυτό η πρωτεΐνη TERT ανιχνεύθηκε στο 92% των νεοπλασμάτων και στο 52% των παρακείμενων μαστικών αδένων. Το mRNA του γονιδίου TERT ανιχνεύθηκε στο 96% των νεοπλασμάτων και στο 88% των παρακείμενων μαστικών αδένων. Καμία συσχέτιση δε διαπιστώθηκε ανάμεσα στην παρουσία της πρωτεΐνης TERT και παραμέτρους όπως ο βαθμός κακοήθειας και ο ιστολογικός τύπος των νεοπλασμάτων, το μεσοδιάστημα ελεύθερο νόσου και το συνολικό χρόνο επιβίωσης των ζώων. Παρόμοια ήταν τα αποτελέσματα και για τους παρακείμενους μαστικούς αδένες. Επίσης, δεν βρέθηκε στατιστικά σημαντική συσχέτιση της TERT με τους άλλους καρκινικούς δείκτες που εξετάστηκαν. Τα αποτελέσματα της παρούσας διατριβής έδειξαν ότι η TERT εκφράζεται στα κακοήθη νεοπλάσματα του μαστού του σκύλου. Η ανίχνευσή της όμως σε υψηλά ποσοστά και στους παρακείμενους μαστικούς αδένες δεν την καθιστά αξιόπιστο διαγνωστικό/προγνωστικό δείκτη