ΚΥΤΤΑΡΟΛΟΓΙΚΗ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΚΑΙ ΑΝΩΝΥΜΩΝ DNA ΚΛΩΝΩΝ - ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΠΟΛΥΓΟΝΙΔΙΑΚΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ HSP70 ΣΤΗ ΜΕΣΟΓΕΙΑΚΗ ΜΥΓΑ CERATITIS ...

Abstract

ΣΤΟΧΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΕΙΝΑΙ Η ΚΥΤΤΑΡΟΛΟΓΙΚΗ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΜΟΡΙΑΚΩΝ ΔΕΙΚΤΩΝ ΣΤΑ ΠΟΛΥΤΑΙΝΙΚΑ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΑ ΤΗΣ ΜΕΣΟΓΕΙΑΚΗΣ ΜΥΓΑΣ CERATITIS CAPITATA, ΜΕ ΤΗΝ ΤΕΧΝΙΚΗ ΤΗΣ IN SITU ΥΒΡΙΔΟΠΟΙΗΣΗΣ. ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΘΗΚΑΝ 20 ΓΟΝΙΔΙΑ ΚΑΙ 37 ΑΓΝΩΣΤΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΚΛΩΝΟΙ. Η ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΕ ΟΤΙ ΟΛΟ ΤΟ 5Ο ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΗΣ C.CAPITATA ΕΙΝΑΙ ΟΜΟΛΟΓΟ ΜΕ ΤΟ Χ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ ΤΗΣ D.MELANOGASTER, ΕΝΩ ΥΠΑΡΧΟΥΝ ΕΝΔΕΙΞΕΙΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΙΘΑΝΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΤΟΥ 3ΟΥ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΟΣ ΤΗΣ D. MELANOGASTER ΜΕ ΤΟ 2Ο ΚΑΙ 6Ο ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ ΤΗΣ C.CAPITATA. H ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΠΟΛΥΤΑΙΝΙΚΩΝ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΩΝ ΣΤΟ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΟ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟ ΕΔΩΣΕ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΥΣΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗ ΔΟΜΗ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΤΟΥΣ. ΥΠΑΡΧΕΙ ΑΣΘΕΝΗΣ ΣΥΝΑΨΗ ΤΩΝ ΟΜΟΛΟΓΩΝ ΧΡΩΜΑΤΙΔΙΩΝ ΠΟΥ ΑΠΑΡΤΙΖΟΥΝ ΚΑΘΕ ΠΟΛΥΤΑΙΝΙΚΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ, ΕΝΩ ΤΑ ΦΥΛΕΤΙΚΑ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΑ (ΧΥ) ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΥΝ, ΑΝ ΚΑΙ ΕΤΕΡΟΧΡΩΜΑΤΙΚΑ, ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑ. ΣΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΤΗΣ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΗΣ ΚΑΙ ΤΟΥ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΥ ΤΩΝ HSP70 ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ C.CAPITATA, ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ 6 HSP70 ΚΛΩΝΟΙ ΑΠΟ ΜΙΑ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑΤΙΚΗ ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ, ΜΕ R ΑΠΟ ΔΙΑΛΟΓΗ ΜΕ DNA ΑΝΙΧΝΕΥΤΗ ΑΠΟ ΕΝΑ HSP70 ΓΟΝΙΔΙΟ ΤΗΣ D. MELANOGASTER. ΚΥΤΤΑΡΟΛΟΓΙΚΗ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΜΕ IN SITU ΥΒΡΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΚΑΙ ΟΙ 6 ΚΛΩΝΟΙ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΟΥΝΤΑΙ ΣΤΗΝ ΙΔΙΑ ΖΩΝΗ(3L/24C), ΠΟΥ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΕΙ ΣΤΗ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΘΕΡΜΟΕΠΑΓΟΜΕΝΗ ΦΥΣΑΛΛΙΔΑ ΤΟΥ ΕΝΤΟΜΟΥ. ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΚΛΩΝΩΝ ΜΕ ΕΝΖΥΜΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΥ, ΣΕ ΣΥΝΔΙΑΣΜΟ ΜΕ ΑΝΑΛΥΣΗ "SOUTHERN" ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΟΙ 6 ΚΛΩΝΟΙ ΟΡΓΑΝΩΝΟΝΤΑΙ ΣΕ 2 ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΤΩΝ 31KB (Α ΚΑΙ Β) ΚΑΙ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ 7 ΥΠΟΨΗΦΙΑ CCSHSP70 ΓΟΝΙΔΙΑ, 4 ΣΤΗΝ ΠΕΡΙΟΧΗ Α ΚΑΙ 3 ΣΤΗΝ ΠΕΡΙΟΧΗ Β.

THE TARGET OF THE PRESENT THESIS IS THE LOCALIZATION OF MOLECULAR MARKERS BY IN SITU HYBRIDIZATION TO POLYTENE CHROMOSOMES OF THE MEDITERRANEAN FRUIT FLY CERATITIS CAPITATA. WE HAVE HYBRIDIZED 20 GENES AND 37 UNKNOWN FUNCTION DNA SEQUENCES. THE CYTOLOGICAL MAPPING OF THE GENES CONFIRMED THAT THE CHROMOSOME 5 OFC.CAPITATA IS ALL HOMOLOGOUS TO THE D.MELANOGASTER X CHROMOSOME. ALSO IT CANBE SPECULATED THAT THE 3RD CHROMOSOME OF D.MELANOGASTER IS HOMOLOGOUS TO C.CAPITATA 2ND AND 6TH CHROMOSOMES. FURTHER WE HAVE INTERESTING INFORMATION FROM THE ELECTRON MICROSCOPE ANALYSIS FOR THE STRUCTURE AND ORGANIZATION OF POLYTENE CHROMOSOMES. THERE IS WEAK SYNAPSIS BETWEEN CHROMATIDS OF POLYTENE CHROMOSOMES AND BOTH X AND Y HETEROCHROMATIC CHROMOSOMES HAVE TRANSCRIPTIONAL ACTIVITY. ALSO, WE ISOLATED SIX MEDFLY HSP70 CLONES BY SCREENING A GENUIC LIBRARY WITH A DNA PROBE FROM A HSP70 GENE OF D.MELANOGASTER. CYTOLOGICAL MAPPING SHOWED THAT ALL SIX CLONES HYBRIDIZED IN SITU IN ONE BAND (31/24C), CORRESPONDING TO THE MAJOR HEAT SHOCK INDUCIBLE PUFF OF C.CAPITATA. RESTRICTION MAPPINGFOLLOWED BY SOUTHERN ANALYSIS INDICATED THAT THE SIX CLONES ARE ORGANIZED INTWO 31KB REGION (A AND B) AND CONTAIN SEVEN PUTATIVE CCSHP70 GENES, FOUR IN REGION A AND THREE IN REGION B.