ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ-ΜΕΛΕΤΗ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΩΝ ΤΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ ΚΑΙ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΡΑΔΙΟΑΝΟΣΟΑΝΑΛΥΣΗΣ ΓΙΑ ΤΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΕΛΕΥΘΕΡΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ ΣΕ ΑΝΘ...

Abstract

ΣΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΕΡΓΑΣΙΑ ΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΕΤΑΙ: Α) ΜΕΘΟΔΟΣ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΩΝ ΤΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ (Τ4) ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ, Β) ΚΑΘΟΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΡΑΔΙΟΕΠΙΣΗΜΑΝΣΗ ΑΥΤΩΝ, Γ) ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΠΙΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΤΩΝ ΠΑΡΑΠΑΝΩ ΠΑΡΑΓΩΓΩΝ ΚΑΙ ΤΗΣ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ΤΟΥ ΟΡΟΥ ΣΤΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥΣ ΜΕ ΤΙΣ ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣΤΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ ΣΤΟΝ ΟΡΟ, Δ) ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΡΑΔΙΟΑΝΟΣΟΑΝΑΛΥΣΗΣ (RIA) ΓΙΑ ΤΗΝ ΜΕΤΡΗΣΗ ΤΗΣ ΕΛΕΥΘΕΡΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ (FT4) ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΣΗ ΩΣ ΙΧΝΗΘΕΤΗ ΤΟΥ ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΕΡΟΥ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΟΥ ΠΑΡΑΓΩΓΟΥ ΚΑΙ Ε)ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΠΟΥ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ. ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΗΤΑΝ ΝΑ ΕΠΙΛΕΓΕΙ ΑΥΤΟ ΤΟ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΟ ΠΑΡΑΓΩΓΟ ΩΣ ΙΧΝΗΘΕΤΗΣ ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΣΤΙΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΑΝΑΛΥΣΗΣ ΝΑ ΠΡΟΣΔΕΝΕΤΑΙ ΜΕ ΤΟ ΑΝΤΙΣΩΜΑ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΤΩΝ ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥΟΡΟΥ ΧΩΡΙΣ ΝΑ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΑ ΜΕ ΑΥΤΕΣ. ΣΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΒΡΕΘΗΚΕ ΤΡΟΠΟΣ ΠΟΣΟΤΙΚΗΣ ΣΥΣΧΕΤΙΣΗΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΩΝ ΤΗΣ ΘΥΡΟΞΙΝΗΣ ΚΑΙ ΤΟΥ ΔΥΝΑΜΙΚΟΥ ΣΥΝΔΕΣΗΣ (C) ΤΩΝ ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥ ΟΡΟΥ ΚΑΙ ΕΠΙΛΕΓΟΝΤΑΣ ΩΣ ΙΧΝΗΘΕΤΗ ΤΟ ΠΑΡΑΓΩΓΟ ΠΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΕ ΕΛΑΧΙΣΤΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΜΕ ΤΙΣ ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΤΟΥ ΟΡΟΥ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΝΕΑ ΕΥΑΙΣΘΗΤΗ ΚΑΙ ΑΚΡΙΒΗΣ ΡΑΔΙΟΑΝΟΣΟΑΝΑΛΥΣΗ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ FT4 ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ ΤΗΣ ΟΠΟΙΑΣ Η ΑΞΙΟΠΙΣΤΙΑ ΕΛΕΓΧΘΗΚΕ ΣΕ ΟΜΑΔΕΣ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ.

THE SCOPE OF THIS STUDY WAS TO COLLECT THE SUITABLE PROTEIN-THYROXIN CONJUGATE AS TRACER, WHICH IN THE CONDITIONS OF IMMUNOASSAY REACT WITH THE ANTIBODY IN THE PRESENCE OF THE T4 BINDING PROTEINS WITHOUT BIND TO THEM FOR THIS SCOPE VARIOUS PROTEINS. THE CONJUGATES PREPARED WERE CHARACTERIZED IN TERMS OF THEIR MW, THE MOLAR RATIO AND THEIR AFFINITY TO BIND WITH THE ANTI-T4 ANTIBODY. WE STUDY THE EFFECT OF THE MW TO THE BINDING TO T4-BINDING PROTEINS USING THE SAME CONDITIONS FOR ALL CONJUGATES AND A FT4 RADIOIMMUNOASSAY WAS DEVELOPED USING THE SUITABLE PROTEIN-THYROXIN CONJUGATE. IN CONCLUSION WE FOUND THAT THE MW OF THE CONJUGATES IS A PARAMETER WHICH SIGNIFICANTLY INFLUENCES THE BINDING OF A CONJUGATE TO THE T4-BINDING PROTEINS. FURTHERMORE, THE USE OF A T4-IGC CONJUGATE WITH VERY LARGE MW AS TRACER CAN LEAD TO THE DEVELOPMENT OF A VALID ASSAY BASED ON LABELLED-ANALOG APPROACH. THE PROPOSED ASSAY RETRIEVES THE SIMPLICITY AND CONVENIENCE THAT CONTRIBUTED TO THE WIDE ACCEPTANCE OF THE ANALOG-BASED METHODS AND SHOULD BE VERY USEFULL FOR ROUTINE DETERMINATION.