Μελέτες πρωτεϊνικής σύνθεσης με χρήση οπτικών λαβίδων και μονομοριακού FRET

Περίληψη

Στο πρώτο μέρος της διατριβής, ριβοσώματα μη ειδικά σημασμένα με το φθορισμοφόρο Atto655 συνδέθηκαν σε χάντρες SiO₂ επικαλυμμένες με στρεπταβιδίνη. Η σύνδεση έγινε μέσω της ριβοσωμικής πρωτεΐνης L4, η οποία βιοτινυλιώθηκε in vivo και κατόπιν ενσωματώθηκε στα ριβοσώματα. Οι χάντρες SiO₂ με τα συνδεδεμένα ριβοσώματα χρησιμοποιήθηκαν για πειράματα με οπτικές λαβίδες. Τα ριβοσώματα συνέθεσαν τις πρωτεΐνες GFPem και ουβικιτίνη πάνω σε μία χάντρα με την εισαγωγή ενός μίγματος in vitro μεταγραφής-μετάφρασης, το οποίο δεν περιείχε το αμινοξύ ιστιδίνη, ώστε να σταματάει η σύνθεση σε μία ουρά έξι ιστιδινών. Το αμινοτελικό άκρο των πρωτεϊνών, το οποίο είχε βιοτινυλιωθεί κατά την σύνθεση με την τεχνική του κατασταλτικού tRNA, ξεπρόβαλε από το κανάλι του ριβοσώματος και ήταν προσβάσιμο για να συνδεθεί μέσω στρεπταβιδίνης σε μία χάντρα πολυστυρενίου, η οποία ήταν παγιδευμένη στις οπτικές λαβίδες. Με τις οπτικές λαβίδες κατέστη δυνατό να μετρηθούν δυνάμεις στην κλίμακα των pN. Αποδείχθηκε ότι απαιτεί ...
περισσότερα

Περίληψη σε άλλη γλώσσα

In the first part of the thesis, ribosomes unspecifically labeled with the fluorescent dye Atto655 were tethered onto SiO₂ beads covered with streptavidin. The ribosomes were tethered via protein L4, which was biotinylated in vivo and incorporated into the ribosomes. The ribosomes tethered onto the beads were used for experiments with optical tweezers. The ribosomes synthesized the proteins GFPem and ubiquitin on a bead by adding an in vitro transcription-translation mix without histidine, in order to stop synthesis in a His-tag. The N-terminus of the proteins, which was biotinylated during synthesis using the suppressor tRNA technique, was barely sticking out of the ribosomal tunnel and it was accessible to bind via streptavidin to a polystyrene bead, which was trapped with the optical tweezers. With the optical tweezers it was possible to measure forces in a pN scale. It was shown that in order to keep a steady hook-up, a force lower than 10 pN should be applied, since higher forces ...
περισσότερα

Όλα τα τεκμήρια στο ΕΑΔΔ προστατεύονται από πνευματικά δικαιώματα.

DOI
10.12681/eadd/20596
Διεύθυνση Handle
http://hdl.handle.net/10442/hedi/20596
ND
20596
Εναλλακτικός τίτλος
Studies of protein synthesis using optical tweezers and single molecule FRET
Συγγραφέας
Κατρανίδης, Αλέξανδρος του Κωνσταντίνος
Ημερομηνία
2009
Ίδρυμα
Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης (ΑΠΘ). Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Φυσικής
Εξεταστική επιτροπή
Χόλη-Παπαδοπούλου Θεοδώρα
Λογοθετίδης Στέργιος
Φραγκής Νικόλαος
Κυριακίδης Δημήτριος
Καλπαξής Δημήτριος
Αρσενάκης Μηνάς
Παναγιωτίδης Χρήστος
Επιστημονικό πεδίο
Φυσικές Επιστήμες
Φυσική
Λέξεις-κλειδιά
Ριβόσωμα; Οπτικές λαβίδες; Μεταφορά ενέργειας λόγω συντονισμού κατά Forster; Μελέτη μεμονωμένων μορίων; Συμμεταφραστική αναδίπλωση; Πρωτεϊνική σύνθεση ελεύθερων κυττάρων; Πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη; In vivo βιοτινυλίωση ριβοσωμάτων
Χώρα
Ελλάδα
Γλώσσα
Ελληνικά
Άλλα στοιχεία
v, 185 σ., εικ.
Στατιστικά χρήσης
ΠΡΟΒΟΛΕΣ
Αφορά στις μοναδικές επισκέψεις της διδακτορικής διατριβής.
Πηγή: Google Analytics.
ΞΕΦΥΛΛΙΣΜΑΤΑ
Αφορά στο άνοιγμα του online αναγνώστη.
Πηγή: Google Analytics.
ΜΕΤΑΦΟΡΤΩΣΕΙΣ
Αφορά στο σύνολο των μεταφορτώσων του αρχείου της διδακτορικής διατριβής.
Πηγή: Εθνικό Αρχείο Διδακτορικών Διατριβών.
ΧΡΗΣΤΕΣ
Αφορά στις μοναδικές επισκέψεις της διδακτορικής διατριβής.
Πηγή: Εθνικό Αρχείο Διδακτορικών Διατριβών.
Σχετικές εγγραφές (με βάση τις επισκέψεις των χρηστών)