Διερεύνηση του ρόλου των πολυμορφισμών του γονιδίου του TNF-a στη λεϊσμανίωση του σκύλου

Abstract

Canine leishmaniosis (CanL) constitutes one of the most important parasitic disease in dogs in Greece and the Mediterranean basin. Despite the fact of the high prevalence of the infection in enzootic areas, a lower rate of apparent clinical disease is recorded and many dogs remain asymptomatic. Up to date, it is not clarified which mechanisms in dogs are responsible for resistance or susceptibility. It is accepted that one determining factor for the outcome of CanL is the type of the triggered immune response, which seems to be genetically determined. TNF-α is a cytokine, which plays a crucial role during the immune response against Leishmania parasites. Slc11a1 is a protein which is important for the initial activation of macrophages and is implicated in the regulation of the expression of the cytokine TNF-α. In the present study three polymorphisms in the promoter of the Slc11a1 gene and four polymorphisms, located upstream the ORF of the TNF-α gene were analysed, in order to identify genetic factors associated with resistance or susceptibility to CanL. Statistical analysis showed that, regarding the Slc11a1 gene, the presence of SNP2 Α180G in homologous or eterologous state, as well as the presence of SNP3 G318A in homologous state is correlated with susceptibility to CanL. By Sanger method the nucleotide sequence upstream of the Open Reading Frame of the canine TNF-α gene was determined and four polymorphisms were noted (-40 C/A, -1134 T/G, -1150 T/C και -1243 C/G). Statistical analysis showed that, regarding the TNF-α gene, the polymorphism TNF-α -40 C/Α is correlated with susceptibility to CanL, while the polymorphism TNF-α -1243 C/G is correlated with resistance to CanL.

Η λεϊσμανίωση αποτελεί ένα από τα σημαντικότερα παρασιτικά νοσήματα του σκύλου στην Ελλάδα και στις άλλες παραμεσόγειες χώρες της Ευρώπης. Παρά το γεγονός ότι καταγράφονται υψηλά ποσοστά μόλυνσης των σκύλων στις ενζωοτικές περιοχές, η κλινική εκδήλωση του νοσήματος δεν παρατηρείται σε όλους τους μολυσμένους σκύλους και ένα μεγάλο ποσοστό των σκύλων παραμένουν ασυμπτωματικοί. Μέχρι σήμερα δεν είναι γνωστοί οι παράγοντες που συμμετέχουν στον καθορισμό της ανθεκτικότητας ή της ευαισθησίας στο νόσημα. Η έκβαση της ανοσιακής απόκρισης του ξενιστή, που φαίνεται να προκαθορίζεται γενετικά, θεωρείται ένας από τους κυριότερους. Ο Παράγοντας Νέκρωσης των Όγκων-άλφα (TNF-α) είναι μία κυτταροκίνη που αποτελεί έναν σημαντικό μεσολαβητή της ανοσιακής απόκρισης του ξενιστή στη ΛΣ. Η πρωτεΐνη Slc11a1 κατέχει καθοριστικό ρόλο στα πρώτα στάδια ενεργοποίησης των μακροφάγων και δρα ρυθμιστικά ελέγχοντας την παραγωγή κυτταροκινών, όπως ο TNF-α. Στην παρούσα μελέτη με σκοπό την επισήμανση παραγόντων που συσχετίζονται με την ευαισθησία ή την ανθεκτικότητα του σκύλου στη λεϊσμανίωση μελετήθηκαν τέσσερεις SNPs ανοδικά του ανοιχτού πλαισίου ανάγνωσης του γονιδίου TNF-α. και τρεις SNPs στον προαγωγέα του γονιδίου Slc11a1. Με τη μέθοδο Sanger προσδιορίστηκε η νουκλεοδιτική αλληλουχία ανοδικά του ανοιχτού πλαισίου ανάγνωσης του γονιδίου TNF-α του σκύλου και επισημάνθηκαν 4 πολυμορφικές θέσεις (-40 C/A, -1134 T/G, -1150 T/C και -1243 C/G). Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων προέκυψε ότι ο πολυμορφισμός TNF-α -40 C/Α συσχετίζεται με την ευαισθησία στη μόλυνση, ενώ ο πολυμορφισμός TNF-α -1243 C/G συσχετίζεται με την ανθεκτικότητα στη μόλυνση. Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων αναφορικά με το γονίδιο Slc11a1, προέκυψε ότι η ύπαρξη του SNP2 Α180G σε ομόζυγη ή ετερόζυγη κατάσταση, καθώς και η ύπαρξη του SNP3 G318A σε ομόζυγη κατάσταση ενδέχεται να αποτελούν παράγοντες ευαισθησίας στη λεϊσμανίωση.