Ιστική εκτίμηση φλεγμονωδών αλλοιώσεων παχέος εντέρου, λοιμώδους αιτιοπαθογένεσης ή μη, σε σχέση με την επάρκεια του ανοσιακού συστήματος των ασθενών

Abstract

We attempted to study whether the presence of T-regulatory cells in tissue obtained from patients with an inflammatory bowel disease augment when Cytomegalovirus coexists in the bowel. Experimental data were analysed using statistical methods and were combined with bibliographical references in an attempt to investigate the role of Treg cells in immunodeficient patients with or without CMV infection. Sixty-one cases of inflammatory bowel disease were divided into two groups. The first one included patients with either Crohn’s disease or ulcerative colitis that coexisted with CMV bowel infection, whereas the second group (control group) consisted of patients with inflammatory bowel disease without CMV infection. Formalin-fixed, paraffin-embedded tissues were immunohistochemically elaborated with CMV-specific and Foxp3 rabbit polyclonal antibodies and the stained sections were microscopically evaluated in order to define Foxp3 protein levels and the attendance of Tregs in specific tissues. Statistical analysis of the evaluated samples revealed statistically significant correlation between CMV’s presence and high number of Tregs in bowel tissue. There was no evidence that CMV is related with acute phases of inflammatory bowel disease. Tregs were diminished in patients with disease in recession while they were strongly augmented in patients with active IBD. Eosinophils attendance was also examined and the results proved statistically significant correlation between the number of eosinophils and Treg number in the examined samples. Completing our study a few observations have to be mentioned: 1. Treg number is remarkably higher in patient tissues with acute IBD and serious inflammation. Nevertheless it is unclear whether in vitro Tregs’ suppressive potency that has confirmed as normal in IBD patients, reflect with accuracy their activity in vivo, given the fact that they finally fail to control mucosal inflammation in those patients. 2. The correlation between Foxp3+Tregs and IBD activation could effortlessly be explained by the hypothesis that human immune system tries to overcome the light immune deficiency that led to IBD outbreak and to get protected against it. 3. Treg presence in bowel tissue seems to be protective against CMV and damage it causes and maybe this mechanism is activated without any inconvenience in IBD patients because of their already augmented Treg presence in bowel tissue in an effort to ameliorate the immunoregulatory ability of inflamed tissue. 4. When inflammation is prolonged and certain cells such as eosinophils accumulate, immune system aborts the occupation with the already located tissue inflammation as well as further Treg mobilization, provided that circumstances consolidate. The findings of our study demonstrate that Treg infiltration in inflamed mucosal tissues of IBD patients show a significant increase when CMV infection coexists in comparison with IBD patients without any intestinal infectious disease. Treg cells play a crucial role in suppressing local inflammation induced by viral intestinal infections and their regulatory potential may improve the state of intestinal mucosa by providing an active defensive mechanism against CMV, even in patients with partial immune deficiency, like IBD patients. The influence of Tregs over viral colon infection of patients with IBD should be further studied retrospectively and prospectively in order to determine whether these Foxp3+ T cells can be of value in a therapeutic context in order to control ongoing inflammation.

Η μελέτη αφορά στην εκτίμηση της παρουσίας των Τ ρυθμιστικών κυττάρων σε ιστούς ασθενών με Ιδιοπαθή φλεγμονώδη νόσο του εντέρου, όταν συνυπάρχει παρουσία του κυτταρομεγαλοϊού (CMV) ως μοναδικού παθογόνου λοιμώδη παράγοντα στο έντερο. Τα πειραματικά δεδομένα αναλύθηκαν με στατιστική μέθοδο και συνδυάστηκαν με βιβλιογραφικές αναφορές σε μια προσπάθεια να διερευνηθεί ο ακριβής ρόλος των Tregs στους ανοσοανεπαρκείς ασθενείς με ή χωρίς CMV λοίμωξη. Μελετήθηκαν 61 περιπτώσεις ασθενών με Ιδιοπαθή φλεγμονώδη νόσο του εντέρου, οι οποίες χωρίστηκαν σε δυο ομάδες. Η πρώτη περιελάμβανε ασθενείς με νόσο Crohn ή ελκώδη κολίτιδα, οι οποίες συνυπήρχαν με CMV λοίμωξη στο έντερο, ενώ η δεύτερη ομάδα (ομάδα μάρτυρας) περιελάμβανε ασθενείς με Ιδιοπαθή φλεγμονώδη νόσο του εντέρου χωρίς παρουσία CMV. Στους κύβους παραφίνης των εντερικών ιστών των ασθενών έγινε ανοσοϊστοχημική κατεργασία με ειδικά για τον CMV και την Foxp3 πολυκλωνικά αντισώματα και οι κεχρωσμένες τομές αξιολογήθηκαν μικροσκοπικά ώστε να ανιχνευθεί η παρουσία του CMV και να ποσοτικοποιηθεί η παρουσία της Foxp3 και των Tregs στους μελετώμενους ιστούς. Η στατιστική ανάλυση των δειγμάτων μετά τη μικροσκοπική αξιολόγησή τους έδειξε στατιστικά σημαντική συσχέτιση ανάμεσα στην παρουσία του CMV και τον αυξημένο αριθμό των Tregs στον εντερικό ιστό. Δεν υπήρξαν στοιχεία ότι η παρουσία του CMV σχετίζεται με την ενεργότητα της Ιδιοπαθούς φλεγμονώδους εντερικής νόσου. Ο αριθμός των Tregs αποδείχθηκε σημαντικά μειωμένος στους ιστούς ασθενών με νόσο σε ύφεση, σε αντίθεση με τους ασθενείς με ενεργό ΙΦΝΕ όπου τα Tregs ανιχνεύθηκαν σε σαφώς υψηλότερους πληθυσμούς. Μελετήθηκε ακόμα η συσχέτιση με την παρουσία ηωσινοφίλων στον ιστό και τα αποτελέσματα αποκάλυψαν αξιόλογη μείωση των Tregs επί παρουσίας πολλών ηωσινοφίλων. Οι παρατηρήσεις που προκύπτουν από την εργασία μας και θα πρέπει να επισημανθούν είναι: 1. Ο αριθμός των Τ ρυθμιστικών κυττάρων είναι σημαντικά μεγαλύτερος στους ιστούς ασθενών με ενεργό ΙΦΝΕ και βαριές φλεγμονώδεις βλάβες. Ωστόσο, είναι ασαφές εάν οι in vitro κατασταλτικές δράσεις που έχουν επιβεβαιωθεί ως φυσιολογικές στα Tregs των ασθενών με ΙΦΝΕ αντανακλούν με ακρίβεια την in vivo δραστηριότητα τους, δεδομένης της τελικής αποτυχίας τους στη ρύθμιση της βλεννογόνιας φλεγμονής στους ασθενείς με ΙΦΝΕ. 2. Ο θετικός συσχετισμός των Foxp3+Tregs με την ενεργότητα των ΙΦΝΕ θα μπορούσε επίσης να οδηγήσει στο συμπέρασμα ότι στην ΙΦΝΕ το ανοσοποιητικό σύστημα βρίσκεται σε μια προσπάθεια να υπερβεί το ελαφρύ ανοσολογικό έλλειμμα που έχει και οδήγησε στην εμφάνιση της νόσου, αλλά και να προστατευθεί από αυτή. 3. Η παρουσία των Tregs στον εντερικό ιστό φαίνεται να δρα προστατευτικά έναντι του CMV και των βλαβών που προκαλεί και ίσως αυτός ο μηχανισμός ενεργοποιείται ευκολότερα στους ασθενείς με ΙΦΝΕ, οι οποίοι έχουν ήδη προσελκύσει μια μικρή συσσώρευση Tregs στον εντερικό ιστό προσπαθώντας να βελτιώσουν την ανοσορυθμιστική ικανότητα του ιστού που φλεγμαίνει. 4. Όταν η φλεγμονή μεταπίπτει σε χρονιότητα και παρατηρείται συνάθροιση κυττάρων χρονιότητας, όπως τα ηωσινόφιλα, διακόπτεται εν μέρει η ενασχόληση του ανοσοποιητικού με την ήδη εγκατασταθείσα φλεγμονή και η εκ νέου κινητοποίηση Τ ρυθμιστικών κυττάρων, καθώς οι συνθήκες σταθεροποιούνται. Συμπερασματικά, τα ευρήματα της έρευνάς μας κατέδειξαν ότι οι διηθήσεις των Tregs στους φλεγμαίνοντες βλεννογονικούς ιστούς των ασθενών με Ιδιοπαθή Φλεγμονώδη εντερική νόσο παρουσιάζουν μια αξιοσημείωτη αύξηση όταν συνυπάρχει λοίμωξη με CMV στον εντερικό ιστό, σε σύγκριση με ασθενείς που νοσούν από νόσο Crohn ή ελκώδη κολίτιδα χωρίς ωστόσο να ανιχνεύεται άλλος παθογόνος λοιμώδης παράγοντας στον εντερικό βλεννογόνο. Τα Tregs έχουν έναν εξαιρετικά κρίσιμο ρόλο στην καταστολή της τοπικής φλεγμονής που επάγεται από ιογενείς εντερικές λοιμώξεις και η ρυθμιστική τους ικανότητα μπορεί να βελτιώσει την κατάσταση του εντερικού βλεννογόνου παρέχοντας έναν αποτελεσματικό αμυντικό μηχανισμό έναντι του CMV, ακόμα και σε ασθενείς με μερική ανοσοανεπάρκεια όπως οι ασθενείς με Ιδιοπαθή φλεγμονώδη εντερική νόσο. Περαιτέρω μελέτη των Tregs θα μπορούσε να διαλευκάνει αν αυτά τα Foxp3+T κύτταρα μπορούν να προσφέρουν αξιόλογη βοήθεια στην προσπάθεια ελέγχου μιας αναδυόμενης φλεγμονής.