Προσδιορισμός ανοσοφαινοτύπων λεμφοκυττάρων βρογχοκυψελιδικού εκπλύματος και περιφερικού αίματος στην πνευμονική σαρκοείδωση

Abstract

Aim: The aim of the thesis was to investigate ΤH1/ΤΗ2 και TC1/TC2 phenotypes of T lymphocytes and frequencies of iNKT and CD16/56⁺ T lymphocytes in bronchoalveolar lavage (BAL) and peripheral blood (PB) of patients with pulmonary sarcoidosis by use of flow cytometry. Patients and methods: Twenty patients with pulmonary sarcoidosis, six patients with hypersensitivity pneumonitis and ten normal controls participated in the study. BAL and PB were obtained from patients for diagnostic purposes, while PB was only obtained from normal control subjects. Flow cytometry was used to determine intracellular production of cytokines IFN-γ, IL-2, TNF-α, IL-4 and IL-13 in PMA/ionomycin stimulated CD4⁺ and CD8⁺ Τ lymphocytes. Results: Sarcoidosis patients displayed increased percentages of IFN-γ⁺ CD4⁺ Τ and iNKT lymphocytes in BAL compared to PB, while the opposite was observed for the percentages of IL-2⁺ CD4⁺ , IFN-γ⁺ and TNF-α⁺ CD8⁺, as well as CD16/56⁺ T lymphocytes. Strong positive correlations were observed among the percentages of IFN-γ, IL-2 and TNF-α expression in BAL CD4⁺ and CD8⁺ Τ lymphocytes. Stage I sarcoidosis patients displayed significantly lower percentages of IFN-γ⁺ CD4⁺, IFN-γ⁺ CD8⁺ and TNF-α⁺ CD8⁺ Τ lymphocytes in BAL, compared to stage ll-IV patients. Compared to normal controls, sarcoidosis patients showed lower percentages of IL-4+ and II-13⁺ CD4⁺ Τ lymphocytes and reduced concentration of iNKT lymphocytes in PB. Conclusions: Our findings support the concept of compartmentalization of immune response in the lungs of patients with pulmonary sarcoidosis and show a reduced type 1 immune response in sarcoidosis patients with better anticipated prognosis.

Σκοπός: Σκοπός της διατριβής ήταν η μελέτη των ΤH1/ΤΗ2 και TC1/TC2 φαινοτύπων των Τ λεμφοκυττάρων και των συχνοτήτων των iNKT και CD16/56⁺ Τ λεμφοκυττάρων στο βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα (BAL) και στο περιφερικό αίμα ασθενών με πνευμονική σαρκοείδωση, με χρησιμοποίηση της κυτταρομετρίας ροής. Ασθενείς και μέθοδοι: Είκοσι ασθενείς με πνευμονική σαρκοείδωση, έξι ασθενείς με πνευμονίτιδα από υπερευαισθησία και δέκα φυσιολογικοί μάρτυρες συμμετείχαν στη μελέτη. Από τους ασθενείς λήφθηκε BAL και περιφερικό αίμα για διαγνωστικούς λόγους, ενώ από τους μάρτυρες μόνο περιφερικό αίμα. Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της ενδοκυττάριας παραγωγής των κυτταροκινών IFN-γ, IL-2, TNF-α, IL-4 και IL-13 σε διεγερμένα με PMA/ionomycin CD4⁺ και CD8⁺ Τ λεμφοκύτταρα. Αποτελέσματα: Οι ασθενείς με σαρκοείδωση παρουσίαζαν αυξημένα ποσοστά IFN-γ⁺ CD4⁺ Τ και iNKT λεμφοκυττάρων στο BAL συγκριτικά με το περιφερικό αίμα, ενώ το αντίθετο παρατηρήθηκε για τα ποσοστά των IL-2⁺ CD4⁺, IFN-γ⁺ και TNF-α⁺ CD8⁺, και CD16/56⁺ Τ λεμφοκυττάρων. Ισχυρές θετικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ των ποσοστών έκφρασης IFN-γ, IL-2 και TNF-a από τα CD4⁺ και CD8⁺ Τ λεμφοκύτταρα του BAL. Οι ασθενείς με σαρκοείδωση σταδίου Ι παρουσίαζαν σημαντικά χαμηλότερα ποσοστά IFN-γ⁺ CD4⁺, IFN-γ⁺ CD8⁺ και TNF-α⁺ CD8⁺ Τ λεμφοκυττάρων στο BAL, συγκριτικά με τους ασθενείς σταδίων ΙΙ-IV. Συγκριτικά με τους φυσιολογικούς μάρτυρες, οι ασθενείς με σαρκοείδωση εμφάνιζαν ελαττωμένα ποσοστά IL-4⁺ και IL-13⁺ CD4⁺ Τ λεμφοκυττάρων και μικρότερη συγκέντρωση iNKT λεμφοκυττάρων στο αίμα. Συμπεράσματα: Τα ευρήματα μας ενισχύουν τη θεωρία της διαμερισματοποίησης της ανοσιακής απάντησης στους πνεύμονες των ασθενών με πνευμονική σαρκοείδωση και δείχνουν μειωμένη τύπου 1 ανοσιακή απάντηση στους ασθενείς με αναμενόμενη ευνοϊκότερη πρόγνωση.