Πειραματική μελέτη σταφυλοκοκκικής κερατίτιδας μετά από ενεργητική ανοσοποίηση έναντι του πολυσακχαρίτη ps 20 -kDa

Abstract

S. epidermidis is part of the normal ocular and periocular flora. S. epidermidis is among the most prominent organisms responsible for corneal infections. S. epidermidis strains can produce a highly aggregating extracellular polysaccharide substance known as slime. 20-kDa PS has been shown to be the major antigenic determinant of slime. The purpose of this study is to examine the protective effect of active immunization using 20-kDa PS as antigen in a rabbit model and to induce keratitis with slime producing S. epidermidis strain. For active immunization 20 rabbits received an intradermal immunization with 20-kDaPS and CFA followed by booster immunization. Clinical observations were made weekly for a month period and an Elisa was used to determine the levels of 20-kDa PS antibodies in serum and aqueous humor. The levels of specific anti 20-kDa PS antibodies in serum and aqueous humor following active immunization were significantly higher as compared to controlled group (P<0,001). Active immunized rabbits showed significantly less corneal damage than control rabbits. In the immunohistochemical analyses for proteoglycans were evident that actively immunized rabbits showed significantly less corneal damage and neovascularization as compared to normal corneal tissue. The results show that 20-kDa PS plays a critical role in the pathogenesis of S. epidermidis keratitis and that active immunization significantly protect against corneal S. epidermidis pathology and damage.

Ο S. epidermidis είναι ο επικρατέστερος μικροοργανισμός της φυσιολογικής χλωρίδας του δέρματος και των βλεννογόνων και μεταξύ των σημαντικότερων αιτιών βακτηριακής κερατίτιδας. Η παθογένεια των λοιμώξεων οφείλεται κυρίως στην ικανότητα ορισμένων στελεχών να παράγουν εξωκυττάρια βλεννώδη ουσία, γνωστή ως slime. Κύριος αντιγονικός καθοριστής του slime είναι ο πολυσακχαρίτης 20-kDa. Σκοπός της εργασίας είναι α) η πρόκληση κερατίτιδας από slime θετικό S. epidermidis σε ένα πειραματικό μοντέλο κουνελιών και β) η μελέτη της προστασίας του ιστού μετά από ενεργητική ανοσοποίηση έναντι του αντιγόνου 20-kDa. Η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων βασίστηκε στην κλινική βαθμονόμηση της κερατίτιδας καθώς και στην ανοσοϊστοχημική μελέτη της εξωκυττάριας ουσίας σε επίπεδο γλυκοζαμινογλυκανών (GAGs). Έγινε ενεργητική ανοσοποίηση με χρήση του 20-kDa ως αντιγόνο σύμφωνα με το πρωτόκολλο. Ακολούθησε η πρόκληση κερατίτιδας σε μια ομάδα (η=20) ανοσοποιημένων κουνελιών και σε άλλη ομάδα (η=20 ) μη ανοσοποιημένων-φυσιολογικών μαρτύρων. Καταγράφηκε η κλινική πορεία της κερατίτιδας για ένα μήνα και έγινε προσδιορισμός των επιπέδων των IgG αντισωμάτων στον ορό και το υδατοειδές υγρό και στις δυο ομάδες. Τέλος έγινε ανοσοϊστοχημική μελέτη των πρωτεογλυκανών του κερατοειδούς και στις δύο ομάδες. Τα επίπεδα των αντι-20-kDa PS αντισωμάτων στον ορό και το υδατοειδές στη ανοσοποιημένη ομάδα ήταν σημαντικά υψηλότερα σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Ρ<0,001). Από την κλινική βαθμονόμηση προέκυψε ότι τα ανοσοποιημένα πειραματόζωα είχαν ηπιότερη κλινική εικόνα συγκρινόμενα με τους μάρτυρες. Κατά την ανοσοϊστοχημική μελέτη διαπιστώθηκε χαμηλότερη ανοσοενεργότητα για τη θειϊκή κερατάνη, θειϊκή δερματάνη και θειϊκή ηπαράνη στην ανοσοποιημένη ομάδα, σε σχέση με τους μάρτυρες. Από τα αποτελέσματα προκύπτει ότι η ενεργητική ανοσοποίηση έναντι του 20-kDa PS παρέχει προστασία στον κερατοειδή από τον S. epidermidis.