ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΩΝ ΣΤΟ ΓΑΛΑ ΑΓΕΛΑΔΑΣ ΜΕ ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ

Abstract

A HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC (HPLC) METHOD FOR THE DETERMINATION OF PENICILLIN G, PENICILLIN V, OXACILLIN AND CLOXACILLIN IN COW'S MILK, HAS BEENDEVELOPED. PENICILLINS ARE EXTRACTED FROM MILK WITH DICHLOROMETHANE. CLEAN UP IS ACCOMPLISHED BY PARTITIONING BETWEEN BUFFERS AND ORGANIC SOLVENTS . PENICILLINS ARE FINALLY EXTRACTED INTO CHLOROFORM AS ION PAIRS WITH TETRABUTYLANNONIUM CATIONS. FOR HPLC, A REVERSED-PHASE COLUMN (NUCLEOSIL 5 C18) IS USED. THE MOBILE PHASE IS A MIXTURE OF 0,02M PHOSPHATE BUFFER AND ACETONITRILE (62:38,V/V), PH6, CONTAINING 5 MM TETRABUTYLAMMONIUM HYDROGEN SULFATE. THE ACCURACY OF THE METHOD IS 82,9+3,3% FOR PENICILLIN G, 89,3+5,1% FOR PENICILLIN V, 90,7+2% FOR OXACILLIN AND 90,6+4,6% FOR CLOXACILLIN, WHILE PRECISION DATA SHOW AN OVERALL RELATIVE STANDARD DEVIATION OF 4,61%, 6,56%, 3,77%, AND 5,83% FOR PENICILLIN G, PENICILLIN V, OXACILLIN AND CLOXACILLIN, RESPECTIVELY. THE LINEARITY OF THIS METHOD, WHICH PROVIDES QUANTITATION DOWN TO 4PPB FOR PENICILLIN G AND PENICILLIN V AND 3PPB FOR OXACILLIN AND CLOXACILLIN, IS EXCELLENT (R-2>0.998) IN THE RANGE OF 4-100PPB.

ΔΙΑΜΟΡΦΩΣΗ ΜΙΑΣ ΝΕΑΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗΣ G, ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗΣ V, ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗΣ ΚΑΙ ΚΛΟΔΑΚΙΛΛΙΝΗΣ ΣΕ ΓΑΛΑ ΑΓΕΛΑΔΑΣ, ΜΕ ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ. ΟΙ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΕΣ ΕΚΧΥΛΙΖΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ΓΑΛΑ ΜΕ ΔΙΧΛΩΡΟΜΕΘΑΝΙΟ ΚΑΙ ΑΚΟΛΟΥΘΕΙ ΚΑΤΑΝΟΜΗ ΤΟΥΣ ΜΕΤΑΞΥ ΥΔΑΤΙΚΩΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ ΔΙΑΛΥΜΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΙΚΩΝ ΔΙΑΛΥΤΩΝ. ΤΕΛΙΚΑ ΠΑΡΑΛΑΜΒΑΝΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΧΛΩΡΟΦΟΡΜΙΟ ΜΕ ΤΗ ΜΟΡΦΗ ΖΕΥΓΩΝ ΙΟΝΤΩΝ ΜΕ ΤΕΤΡΑΒΟΥΤΗΛΑΜΜΩΝΙΟ. Η ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΓΙΝΕΤΑΙ ΣΕ ΣΤΗΛΗ ΑΝΤΙΣΤΡΟΦΗΣ ΦΑΣΗΣ (NUCLEOSIL 5 C18) ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΩΣ ΚΙΝΟΥΜΕΝΗ ΦΑΣΗ ΜΙΓΜΑ ΦΩΣΦΟΡΙΚΟΥ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟΥ ΔΙΑΛΥΜΜΑΤΟΣ 0,02Μ ΚΑΙ ΑΚΕΤΟΝΙΤΡΙΛΙΟΥ (62:38,%), ΠΟΥ ΠΕΡΙΕΧΕΙ 5ΜΜ ΟΞΙΝΟ ΘΕΙΙΚΟ ΤΕΤΡΑΒΟΥΤΥΛΑΜΜΩΝΙΟ ΚΑΙ ΕΧΕΙ ΡΗ6. Η ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΕΙΝΑΙ 82,9+3,3% ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗ G, 89,3+5,1% ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗ V, 90.7+2% ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ ΚΑΙ 90,6+4,6% ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΛΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ, ΕΝΩ Η ΟΛΙΚΗ ΕΠΑΝΑΛΗΨΙΜΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΕΙΝΑΙ 4,61%, 6,56%, 3,77% ΚΑΙ 5,83%ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗ G, ΤΗΝ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗ V, ΤΗΝ ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ ΚΑΙ ΤΗΝ ΚΛΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ,ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. Η ΓΡΑΜΜΙΚΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΕΝ ΛΟΓΩ ΜΕΘΟΔΟΥ, ΠΟΥ ΕΠΙΤΡΕΠΕΙ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ4PPB ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗΣ G ΚΑΙ ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗΣ V ΚΑΙ 3PPB ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗΣ ΚΑΙ ΚΛΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗΣ,ΕΙΝΑΙ ΑΡΙΣΤΗ (R-2>0.998) ΓΙΑ ΠΕΡΙΟΧΗ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΩΝ 4 ΕΩΣ 100PPB.