Μελέτη των ενζύμων του γόνου της αλκοολικής αφυδρογονάσης στο έντομο Bactrocera oleae

Abstract

ΣΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΜΕΛΕΤΗ ΕΠΙΛΕΧΘΗΚΕ ΝΑ ΔΙΕΡΕΥΝΗΘΕΙ Ο ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΗΣ ADH ΤΟΥ B. OLEAE.ΓΙΑ ΤΟΝ ΣΚΟΠΟ ΑΥΤΟ ΣΤΟ ΠΡΩΤΟ ΣΤΑΔΙΟ ΕΓΙΝΕ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ADH ΑΠΟ ΝΥΜΦΕΣ ΤΟΥ B. OLEAE ΜΕ ΓΟΝΟΤΥΠΟ SS,II,FF Κ' SI. ΤΟ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ, ΠΕΡΙΛΜΒΑΝΕΙ ΚΛΑΣΜΑΤΩΣΗ ΜΕ ΘΕΙΚΟ ΑΜΜΩΝΙΟ, ΔΥΟ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΑ ΣΤΑΔΙΑ DEAE -SEPHAROSE ΣΤΗΛΗΣ ΚΑΙ ΕΝΑ ΣΤΑΔΙΟ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑΣ ΣΥΓΓΕΝΕΙΑΣ ΣΤΗΝ CIBACRIN BLUE 3GA.ΤΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ ΤΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ ΜΕ SDS-PAGE ΚΑΙ ΤΟ ΣΥΝΟΛΙΚΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΟΥ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ, ΜΕ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΗΘΜΟΥ ΚΑΙΒΡΕΘΗΚΑΝ 26 ΚΑΙ 48 KDA ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ, ΠΟΥ ΕΙΝΑΙ ΤΑΥΤΟΣΗΜΑ ΚΑΙ ΓΙΑ ΤΑ ΤΕΣΣΕΡΑ ΕΝΖΥΜΑ. ΕΠΕΙΔΗ Ο ΑΛΛΗΛΟΜΟΡΦΟΣ ΠΟΥ ΕΠΙΛΕΓΕΤΑΙ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΙΝΑΙ ΤΟ I, ΕΝΩ ΑΥΤΟΣ ΠΟΥ ΕΛΑΤΤΩΝΕΤΑΙ Ο S, Ο ΔΕ ΓΟΝΟΤΥΠΟΣ SI ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΤΗΝ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΠΡΟΣΑΡΜΟΣΤΙΚΟΤΗΤΑ, ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ ΤΟ PH, Η ΘΕΡΜΟΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΚΙΝΤΗΤΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΠΟΥ ΚΑΘΟΡΙΖΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟΥΣ ΓΟΝΟΤΥΠΟΥΣ SS,II ΚΑΙ SI.ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΤΑ ΕΝΖΥΜΑ ADH-SI ΚΑΙ ADH-II ΕΙΝΑΙ ΘΕΡΜΟΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΕΡΑ ΤΟΥ ADH-SS. ΗADH-SS ΕΜΦΑΝΙΖΕΙ ΤΗ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΑΓΧΙΣΤΕΙΑ ΜΕ ΤΑ ΑΛΚΟΟΛΙΚΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΑ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΗΘΗΚΑΝ. Ο ΣΥΝΔΥΑΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ ΤΩΝ ΒΙΟΧΗΜΙΚΩΝ ΠΑΡΑΜΕΤΡΩΝ ΠΟΥ ΕΞΕΤΑΣΤΗΚΑΝ, ΦΑΝΕΡΩΝΟΥΝ ΤΗΝ ΥΠΕΡΚΥΡΙΑΡΧΙΑ ΤΟΥ ΓΟΝΟΤΥΠΟΥ SI ΤΗΣ ADH ΕΝΑΝΤΙ ΤΩΝ ADH-SS Κ' ADH-II ΓΟΝΟΤΥΠΩΝ ΚΑΙ ΒΡΙΣΚΟΝΤΑΙ ΣΕ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΜΕ ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΠΡΟΣΦΑΤΩΝ ΕΡΕΥΝΩΝ

IN THE PRESENT STUDY, IT WAS CHOSEN TO INVESTIGATE THE MECHANISM OF ADH FUNCTION OF B. OLEAE.FOR THIS AIM, AT THE FIRST STAGE, ADH FROM FOUR GENOTYPES SS,II,FF AND SI WAS PURIFIED FROM LARVAE OF B. OLEAE.THE PURIFICATION PROTOCOL, INCLUDES AMMONIUM SULFATE FRACTONATION, TWO CHROMATOGRAPHY STEPS ON DEAE -SEPHAROSE COLUMN AND ONE AFFINITY CHROMATOGRAPHY STEP ON CIBACRON BLUE 3GA. THE MOLECULAR WEIGHT OF THE ADH SUBUNIT WHICH IS DETERMINED BY SDS-PAGE ANALYSIS AND OF THE NATIVE ADH, WHICH IS DETERMIDED BY HPLC, ARE 26 AND 48 KAA RESPECTIVELYAND THEY ARE IDENTICAL FOR THE FOUR ENZYMES.BECAUSE, THE ALLELE I IS SELECTEDIN THE LABORATORY CONDITIONS, WHEREAS THE ALLELE S WHICH IS REDUCED, AND THE SI GENOTYPE INDICATES BETTER OVERALL FITNESS, HAS BEEN STUDIED PH, THERMOSTABILITY AND KINETIC PROPERTIES OF THE ADH PURIFIED ENZYMES, OF THE GENOTYPES SS,II AND SI. THE RESULTS SHOWED THAT THE ADH-SI AND ADH-II ARE MOST THERMOSTABLE OF THE ADH-SS. THE ADH-SS WAS THE HIGHEST AFFINITY FOR THE WERE USED THE COMBINATION OF THE RESULTS OF THE BIOHEMICAL PROPERTIES WHICH HAVE BEEN EXAMINED INDICATE THE OVERDOMINANCE OF THE ADH-SI GENOTYPE AGAINST ADH-SS AND ADH-II IN ACCOSDANCE WITH THE RESULTS OF RECENT STUDIES.