ΔΟΜΙΚΗ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ ΤΩΝ ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΩΝ RAS

Abstract

PRIMARY TUMORS WERE SCREENED IN ORDER TO STUDY STRUCTURAL AND FUNCTIONAL MODIFICATIONS OF THE RAS GENES. QUANTITATIVE, COMPETITIVE (RT-)PRC - RFLP ASSAYS WERE DEVELOPED TO DETECT AND DISCRIMINATE THE EXPRESSION OF MUTANT VERSUS WILD - TYPE ALLELES OF THE K - RAS AND H - RAS GENE. ANALYSIS OF COLORECTAL TUMORS ESTABLISHED CODON 12 AND CODON 13 K - RAS MUTATIONS AT A LEVEL OF 40%. WILD - TYPE AND MUTANT K - RAS ALLELES WERE COEXPRESSED IN ALL PRIMARY TUMORS, BUT THE ASSAY SHOWED THAT STOICHIOMETRICALLY EQUIVALENT AMOUNTS WERE PRESENT IN ONLYONE THIRD. IN OTHERS MUTANT K - RAS WAS OVEREXPRESSED 30 - 60% RELATIVE TO WILD - TYPE. TWO POLYMORPHIC SITES WERE ALSO INVESTIGATED: 1) A HEXANUCLEOTIDEREGION WITHIN INTRON 1 OF H - RAS AND 2) THE VTR REGION OF THE SAME GENE. IN NORMAL TISSUES A LINKAGE DISEQUILIBRIUM WAS FOUND BETWEEN THE TWO POLYMORPHIC SITES. COMPARISON OF NORMAL AND TUMOR SAMPLES OF BLADDER CANCER REVEALED LOH AT THESE SITES INDICATING ALLELIC LOSS. ALSO INSTABILITY WAS DETECTED AT THE HEXANUCLEOTIDE LOCUS, LEADING TO DISRUPTION OF THE LINKAGE DISEQUILIBRIUM. CODON 12 MUTATIONS WERE FOUND AT LOW FREQUENCY. TAKEN TOGHETHER THE DATA INDICATETHAT RAS GENES PLAY A COMPLEX ROLE IN THE DEVELOPMENT OF CANCER.

ΣΕ ΑΥΤΗ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΕΞΕΤΑΣΤΗΚΑΝ ΤΑ ΓΟΝΙΔΙΑ K - RAS ΚΑΙ H - RAS ΓΙΑ ΤΗ ΣΥΜΜΕΤΟΧΗ ΤΟΥΣ ΣΕ ΔΥΟ ΤΥΠΟΥΣ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ: ΤΟΥ ΠΑΧΕΟΣ ΕΝΤΕΡΟΥ ΚΑΙ ΤΗΣ ΟΥΡΟΔΟΧΟΥ ΚΥΣΤΕΩΣ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΑΝ ΠΟΙΟΤΙΚΕΣ ΚΑΙ ΠΟΣΟΤΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ (RT - PCR) ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΚΑΙ ΜΕΤΑΛΛΑΓΜΕΝΩΝ ΜΕΤΑΓΡΑΦΩΝ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ RAS. ΑΝΑΛΥΣΗ ΠΡΩΤΟΓΕΝΩΝ ΟΓΚΩΝ ΤΟΥ ΠΑΧΕΟΣ ΕΝΤΕΡΟΥ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ Η ΣΥΧΝΟΤΗΤΑ ΜΕΤΑΛΛΑΓΩΝ ΣΤΑ ΚΩΔΙΚΟΝΙΑ 12, 13 ΕΙΝΑΙ 40%. ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΟΤΙ ΤΟ K - RAS ΕΚΦΡΑΖΕΤΑΙ ΣΕ ΟΛΟΥΣ ΤΟΥΣ ΠΡΩΤΟΓΕΝΕΙΣ ΟΓΚΟΥΣ, ΕΝΩ ΣΕ ΟΓΚΟΥΣ ΜΕ ΜΕΤΑΛΛΑΓΕΣ ΕΚΦΡΑΖΟΝΤΑΙ ΤΑΥΤΟΧΡΟΝΑΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΤΑΛΛΑΓΜΕΝΑ ΜΕΤΑΓΡΑΦΑ. ΣΤΟΙΧΕΙΟΜΕΤΡΙΚΕΣ ΑΝΑΛΟΓΙΕΣ ΜΕΤΑΞΥ ΤΩΝΔΥΟ ΤΥΠΩΝ MRNA ΒΡΕΘΗΚΑΝ ΣΤΟ ΕΝΑ ΤΡΙΤΟ ΤΩΝ ΕΤΕΡΟΖΥΓΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ. ΣΤΑ ΥΠΟΛΟΙΠΑ ΤΟ ΜΕΤΑΛΛΑΓΜΕΝΟ K - RAS ΥΠΕΡΕΚΦΡΑΖΟΤΑΝ ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟΥ ΚΑΤΑ 30 - 60%. ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ H - RAS ΕΞΕΤΑΣΤΗΚΑΝ ΔΥΟ ΠΟΛΥΜΟΡΦΙΚΕΣ ΠΕΡΙΟΧΕΣ: 1) ΜΙΑ ΕΞΑΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗ ΕΠΑΝΑΛΗΨΗ ΣΤΟ ΠΡΩΤΟ ΕΣΩΝΙΟ, ΚΑΙ 2) ΜΙΑ ΠΕΡΙΟΧΗ VTR ΣΤΟ 3' ΑΚΡΟ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ. ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΔΥΟ ΠΕΡΙΟΧΩΝ ΣΕ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟΥΣ ΙΣΤΟΥΣ ΕΔΕΙΞΕ ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ ΑΝΑΜΕΣΑ ΤΟΥΣ. ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΤΩΝ ΠΡΟΤΥΠΩΝ ΤΩΝ ΔΥΟ ΠΕΡΙΟΧΩΝ ΜΕΤΑΞΥ ΚΑΡΚΙΝΙΚΩΝ ΚΑΙ ΠΑΡΑΚΕΙΜΕΝΩΝ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΙΣΤΩΝ ΕΔΕΙΞΕ ΑΠΩΛΕΙΑ ΤΗΣ ΕΤΕΡΟΖΥΓΩΤΙΑΣ (LOH) ΣΕ ΠΟΣΟΣΤΟ 20%. ΕΠΙΣΗΣ ΕΝΤΟΠΙΣΤΗΚΕ ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΑΣΤΑΘΕΙΑ ΤΗΣ ΕΞΑΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ ΣΕ ΠΟΣΟΣΤΟ 16%, ΕΝΩ Η ΠΕΡΙΟΧΗ VTR ΕΜΕΙΝΕ ΑΝΕΠΗΡΡΕΑΣΤΗ. ΣΗΜΕΙΑΚΕΣ ΜΕΤΑΛΛΑΓΕΣ ΤΟΥ ΚΩΔΙΚΟΝΙΟΥ 12 ΒΡΕΘΗΚΑΝ ΣΕ ΠΟΣΟΣΤΟ 4%. ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΑΥΤΑ ΔΕΙΧΝΟΥΝΟΤΙ ΤΑ ΜΕΛΗ ΤΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ RAS ΥΠΟΚΕΙΝΤΑΙ ΣΕ ΠΟΛΛΑΠΛΟΥΣ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΥΣ ΡΥΘΜΙΣΗΣΚΑΙ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗΣ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΟΓΚΟΓΕΝΕΣΗ.