Αναρρόφηση ωοθυλακίων σε νεαρές αμνάδες: μελέτη της ποιότητας των συλλεγόμενων ωαρίων και της αναπαραγωγικής ικανότητάς τους

Abstract

Current concepts for the manipulations of farm animals suggest that beyond the fulfillment of the primary scope of assisted reproduction - which in this case is the collection of oocytes of good quality from ewe-lambs - the welfare and the future reproductive performance of the donors should remain unaffected. Using as a model lambs of Karagouniko breed, the present thesis was mainly focused on the study of: (1) the follicular development at particular ages in ewe-lambs, (2) the ovarian response and oocyte recovery rate after singe or repeated laparoscopic follicular aspiration (OPU) at different ages, (3) the modification of the ovarian stimulatory protocols, (4) the meiotic competence of oocytes collected after single or repeated OPU, (5) the effects of follicular aspiration and ovarian stimulation in winter- or autumn-born lambs on their onset of puberty, body growth and future reproductive performance and (6) the feasibility to predict the lambs with good follicular development based on oestradiol concentration in blood samples collected during the stimulatory treatment. The results indicate that: (1) normal follicular development of Karagouniko lambs does not substantially differ from that of other breeds, (2) follicular development after ovarian stimulation using fixed FSH dose decreases with the age of donor-lamb. However, ovarian response is relatively stable when the FSH dose is adjusted to the body weight of lambs, irrespectively to the lambs’ age. (3) adjusting the administered gonadotrophin dose to lamb’s body weight, the number and the quality of collected oocytes can be much improved, (4) at the 3rd and 4th month of age the collected oocytes appear to be incapable for in vitro maturation. This did not stand true when an additional OPU preceded the one performed at the aforementioned ages, (5) both the hormonal treatments and the OPU technique - applied even consecutively - do not affect the onset of puberty, the body growth and the reproductive activity irrespectively of the season of birth and that (6) assessment of oestradiol concentration 12 hours before OPU is a safe criterion to predict good oocyte donor-lambs, although poor donors can be precluded as early as 12 hours after the start of the stimulatory treatment.

Οι σύγχρονες αντιλήψεις για τη διαχείριση των αγροτικών ζώων επιβάλλουν οι μέθοδοι υποβοηθούμενης αναπαραγωγής που εφαρμόζονται σε αμνάδες να αποδίδουν υψηλά ποσοστά παραγωγής εμβρύων δίχως όμως να επηρεάζουν τη φυσιολογική αναπαραγωγική ικανότητα και την ευζωία των δοτριών. Χρησιμοποιώντας ως μοντέλο αμνάδες Καραγκούνικης φυλής, η παρούσα διατριβή εκπονήθηκε με στόχο τη μελέτη: (1) της ανάπτυξης των ωοθυλακίων σε διάφορες ηλικίες, (2) της ανταπόκρισης των ωοθηκών μετά από μία ή επανειλημμένη πρόκληση πολλαπλής ανάπτυξης ωοθυλακίων (ΠΠΑΩ) και του ποσοστού συλλογής ωαρίων μετά από λαπαροσκοπική αναρρόφηση ωοθυλακίων (OPU) σε διάφορες ηλικίες, (3) της συνεισφοράς της δόσης της γοναδοτροπίνης στην ανταπόκριση των ωοθηκών, (4) της ικανότητας ωρίμανσης in vitro των συλλεγόμενων ωαρίων από μία ή επανειλημμένες OPU, (5) των επιδράσεων της ΠΠΑΩ και της OPU στην ενήβωση, στη μυοσκελετική ανάπτυξη και στη μελλοντική αναπαραγωγική ικανότητα των αμνάδων που γεννήθηκαν χειμώνα ή φθινόπωρο και (6) της πιθανότητας πρόβλεψης των αμνάδων που ανταποκρίνονται καλά στην ΠΠΑΩ με βάση τη συγκέντρωση της οιστραδιόλης (Ε2) στον ορό του αίματος σε διάφορα στάδια της αγωγής. Τα αποτελέσματα των παραπάνω παραγόντων καταδεικνύουν ότι: (1) η φυσιολογική ανάπτυξη των ωοθυλακίων αμνάδων Καραγκούνικης φυλής δε διαφέρει από την αντίστοιχη άλλων φυλών, (2) η ανταπόκριση των ωοθηκών εφαρμόζοντας την ίδια αγωγή με γοναδοτροπίνες μειώνεται με την πάροδο της ηλικίας. Όμως, όταν η αγωγή προσαρμόζεται στο σωματικό βάρος του κάθε ζώου η ανταπόκριση αυτή παραμένει σχετικά σταθερή ανεξάρτητα από την ηλικία, (3) ο αριθμός και η ποιότητα των συλλεγόμενων ωαρίων παρουσιάζει βελτίωση εάν η ορμονική αγωγή προσαρμοστεί στο σωματικό βάρος της κάθε αμνάδας, (4) τα ωάρια που συλλέγονται από αμνάδες ηλικίας 3 και 4 μηνών δεν ωριμάζουν in vitro. Όμως, αν σε αμνάδες έχει διενεργηθεί OPU και σε νεαρότερη ηλικία, τα ωάρια που συλλέγονται από αυτές ωριμάζουν in vitro και στις προαναφερθείσες ηλικίες, (5) η OPU και η ΠΠΑΩ δεν επηρεάζουν την ενήβωση, τη μυοσκελετική ανάπτυξη και την αναπαραγωγική ικανότητα των αμνάδων που έχουν γεννηθεί σε διαφορετικές εποχές και (6) με βάση τη συγκέντρωση της Ε2 στον ορό του αίματος 12 ώρες πριν από τη διενέργεια της OPU μπορούν να προβλεφθούν οι αμνάδες που δεν ανταποκρίνονται καλά στην ορμονική αγωγή. Πρώιμος εντοπισμός των αμνάδων που δεν ανταποκρίνονται καθόλου στην ΠΠΑΩ μπορεί να επιτευχθεί με προσδιορισμό της Ε2 τουλάχιστον 12 ώρες μετά την έναρξη της αγωγής.