Μηχανισμοί αντοχής της serratia marcescens στα β-λακταμικά αντιβιοτικά.

Abstract

ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ ΗΤΑΝ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΩΝ ΜΗΧΑΝΙΣΜΩΝ ΑΝΤΟΧΗΣ ΤΗΣ SERRATIA MARCESCENS ΣΤΙΣ ΝΕΟΤΕΡΕΣ Β-ΛΑΚΤΑΜΕΣ.ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ 33 ΚΛΙΝΙΚΑ ΣΤΕΛΕΧΗ S.MARCESCENS, ΠΡΟΕΡΧΟΜΕΝΑ ΑΠΟ ΙΣΑΡΙΘΜΟΥΣ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΝΟΣΟΚΟΜΕΙΩΝ ΤΟΥ ΝΟΜΟΥ ΑΤΤΙΚΗΣ.ΤΟ 40% ΤΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ ΗΤΑΝ ΑΝΘΕΚΤΙΚΑ ΣΤΙΣ ΚΕΦΑΛΟΣΠΟΡΙΝΕΣ Γ' ΓΕΝΙΑΣ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΖΤΡΕΟΝΑΜΗ.Η ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΠΟΥ ΑΚΟΛΟΥΘΗΘΗΚΕ ΠΕΡΙΕΛΑΜΒΑΝΕ :Α)ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣ ΓΟΝΙΔΙΑΚΗΣ ΕΝΤΟΠΙΣΗΣ ΤΗΣ ΑΝΤΟΧΗΣ ΜΕ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΗΣ ΣΥΖΕΥΞΗΣ, ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ ΜΕ DNA-ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥΣ ΜΕ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΕΣ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΕΣ, Β)ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΒΛΑΚΤΑΜΑΣΩΝ ΜΕ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΗ ΕΣΤΙΑΣΗ, Γ)ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΜΕΤΑΦΕΡΟΜΕΝΩΝ ΜΕΣΩ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ Β-ΛΑΚΤΑΜΑΣΩΝ ΠΟΥ ΘΕΩΡΗΘΗΚΑΝ ΥΠΕΥΘΥΝΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΤΟΧΗ ΣΤΑ ΝΕΟΤΕΡΑ Β-ΛΑΚΤΑΜΙΚΑ ΑΝΤΙΒΙΟΤΙΚΑ, ΜΕ ΜΕΤΡΗΣΗ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΥΔΡΟΛΥΣΗΣ ΤΗΣ ΚΕΦΑΚΟΡΙΔΙΝΗΣ ΠΡΙΝ ΚΑΙ ΜΕΤΑ ΤΗΝ ΕΠΑΓΩΓΗ ΜΕ ΚΕΦΟΞΙΤΙΝΗ ΚΑΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΦΑΣΜΑΤΟΣ ΥΔΡΟΛΥΟΜΕΝΩΝ Β-ΛΑΚΤΑΜΙΚΩΝ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΩΝ, Δ)ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΟΥ ΡΟΛΟΥ ΤΗΣ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΙΚΗΣ ΚΕΦΑΛΟΣΠΟΡΙΝΑΣΗΣ ΤΗΣ S.MARCECSENS ΣΤΗΝ ΑΝΤΟΧΗ ΣΤΙΣ Γ'ΓΕΝΙΑΣ ΚΕΦΑΛΟΣΠΟΡΙΝΕΣ, ΜΕ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ ΜΕΤΑΜΟΡΦΩΣΗΣ ΑΝΤΙΠΡΟΣΩΠΕΥΤΙΚΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ S.MARCESCENS ΜΕ ΤΟ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΓΟΝΙΔΙΟ AMPD ΠΟΥ ΕΛΕΓΧΕΙ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ.ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΤΟ 92% ΤΩΝ ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ ΣΤΙΣ Γ'ΓΕΝΙΑΣ ΚΕΦΑΛΟΣΠΟΡΙΝΕΣ ΣΤΕΛΕΧΩΝ,ΜΕΤΑΒΙΒΑΖΑΝ ΤΗΝ ΑΝΤΟΧΗ ΣΤΙΣ ΝΕΟΤΕΡΕΣ Β-ΛΑΚΤΑΜΕΣ ΣΕ ΔΕΚΤΕΣ E.COLI, ΜΕΣΩ ΜΕΓΑΛΩΝ ΣΥΖΕΥΤΙΚΩΝ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ ΠΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΑΝ ΜΕΓΑΛΟΥ ΒΑΘΜΟΥ ΟΜΟΙΟΤΗΤΑ ΜΕΤΑΞΥ ΤΟΥΣ.ΤΑ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑ ΑΥΤΑ ΗΤΑΝ ΥΠΕΥΘΥΝΑ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΜΙΑΣ Β-ΛΑΚΤΑΜΑΣΗΣ, ΜΕ ΙΣΟΗΛΕΚΤΙΚΟ ΣΗΜΕΙΟ 8,2 ΠΟΥ ΑΝΑΣΤΕΛΛΟΤΑΝ ΑΠΟ ΤΟ ΚΛΑΒΟΥΛΑΝΙΚΟ ΟΞΥ ΚΑΙ ΥΔΡΟΛΥΕ ΦΑΣΜΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΩΝ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΟ ΓΙΑ ΤΙΣ Β-ΛΑΚΤΑΜΑΣΕΣ ΤΥΠΟΥ SHV-5.Η ΜΕΤΑΜΟΡΦΩΣΗ

AIM OF THIS STUDY WAS THE CHARACTERIZATION OF THE PREVALENT MECHANISMS OF RESISTANCE TO THE NEWER B-LACTAN ANTIBIOTICS IN S.MARCESCENS ISOLATES OF GREEK HOSPITALS.THIRTY-THREE (33) NON-REPETITIVE CLINICAL STRAINS ISOLATED IN FIVE HOSPITALS OF THE ATTICA REGION WERE COLLECTED.FOURTY PER CENT(40%) OF THEM WERE RESISTANT TO 3RD GENERATION CEPHALOSPORINS(36C) AND AZTREONAN.METHODOLOGY FOLLOWED, INCLUDED: A)LOCALIZATION OF RESISTANCE DETERMINANTS ON PLASMIDS DY CONJUGAL TRANSFER OF 36C-RESISTANCE FROM S. MARCESCENS WILD STRAINS TO E.COLI RECIPIENTS, DETECTION OF RESISTANCE PLASMIDS TRANSFERRED IN THE E.COLI TRANASCONJUGANTS BY PLASMID DNA AGAROSE GEL ELECTROPHORESIS AND CHARACTERIZATION OF THE PLASMIDS BY RESTRICTION ENDONUCLEASE ANALYSIS.B)DETECTION OF PLASMID-MEDIATED B-LACTANASES PRODUCTED BY THE WILD STRAINS AND THE TRANSCONJUGANT CLONES BY ISOELECTRIC FOCUSING.C)CHARACTERIZATION OF THE PLASMID-MEDIATED B-LACTANASES THAT CONSIDERED AS RESPONSIBLE FOR RESISTANSE TO 3GC,ON THE BASIS OF THEIR SUBSTRATE PROFILE AND HYDROLYTIC ACTIVITY AGAINST CEPHALORIDINE, BEFORE AND AFTER INDUCTION WITH CEFOXITIN.(D)INVESTIGATION OF THE ROLE OF THE CHROMOSOMAL CEPHALOSPORINASE OF S.MARCESCENS IN THE 3GC RESISTANCE PHENOTYPE.THIS STEP WAS PERFORMED BY GENETIC COMPLEMETATION EXPERIMENTS, INCLUDING THE INTRODUCTION INTO REPRESENTATIVE STRAINS OF S.MARCESCENS OF THE AMPD REGULATORY GENE THAT CONTROLS THE PRODUCTION OF CHROMOSOMAL CEPHALO-SPORINASE.OUR RESULTS SHOWED THAT NINTY-TWO PER CENT(92%) OF THE 3GC- RESISTANT STRAINS WERE ABLE TO TRANSFER THIS RESISTANCE PHENOTYPE TO E.COLI RECIPIENTS THROUGH LARGE CON