ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΑΝΘΡΩΠΙΝΩΝ ΕΓΚΕΦΑΛΙΚΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ ΜΕ ΕΜΦΑΣΗ ΣΤΗΝ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΤΩΝ ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΑΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΛΟΙΜΩΞΕΩΣ ΤΟΥΣ ΑΠΟ ΤΟΝ HIV-1

Abstract

WE DEVELOPED MIXED HUMAN DISSOCIATE BRAIN CULTURES USING FETAL AUTOPSY TISSUE.THE MIXED CULTURES CONTAINED ALL THE DIFFERENT CELL TYPES THAT COMPRISE THE HUMAN BRAIN(NEURONS,ASTROCYTES,MICROGLIA AND OLIGODENDOCYTES),AS PROVEN BY IMMUNOCYTOCHEMISTRY FOR CELLULAR MARKERS.WE FYRTHER ISOLATED AND PURIFIED THE MICROGLIA POPULATION FROM DISSOCIATED CULTURE USING THE DIFFERENTIAL EARLY ADHERENCE OF THESE CELLS.THE MICROGLIAL CULTURES THAT WE DEVELOPED FROM AUTOPSY TISSUE FROM A 1,5 MONTH OLD INFANT HAD LESS THAN 1% ADMIXTURE OF ASTROCYTES.MICROGLIA STAINED POSITIVE FOR CD68,AND,TO A LESSER DEGREE,FOR THE ENDOTOXIN RECEPTOR(CD14).BY FACS THEY EXHIBITED RED AND GREEN AUTOFLUORESCENCE.GM-CSF AT 100 U/ML INDUCED MARKED MORPHOLOGIC CHANGES TO MICROGLIA WITH FORMATION OF LARGE SPINDLE-AND ROD-LIKE CELLS.LIPOPOLYSACCHARIDE ALSO INDUCED SPINDLING ON ACUTE EXPOSURE,AND CELL DEATH ON LONG-TERM EXPOSURE.MICROGLIA WERE INFECTED WITH FOUR DIFFERENT STRAINS OF HIV-1(IIIB,JR-FL,JR-CSF,BAL)UNDER DIFFERENT CONDITIONS OF STIMULATION IN THE PRESENCE OF ABSENCE OF GM-CSF AND ENDOTOXIN.THE INFECTED CULTURES EXHIBITED MORPHOLOGIC CHANGES SIMILAR TO THESE OBSERVED IN THE BRAINS OF PATIENTS WITH AIDS-DEMENTIA COMPLEX,I.E.MICROGLIAL NODULES AND FORMATION OF GIANT CELLS.GM-CSF COULD INDUCE CELL CLUSTERING IN THE ABSENCE OF INFLECTION,THOUGH TO A LESSER EXTENT.(ΑΠΟΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΥΛΙΚΟ ΑΥΤΟΨΙΑΣ ΑΠΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΕΜΒΡΥΙΚΟ ΕΓΚΕΦΑΛΙΚΟ ΙΣΤΟ ΑΝΑΠΤΥΞΑΜΕ ΜΙΚΤΕΣ ΕΓΚΕΦΑΛΙΚΕΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ IN VITRO.Η ΜΕΛΕΤΗ ΑΥΤΗ ΤΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΥΝ ΟΛΑ ΤΑ ΚΥΡΙΑ ΕΙΔΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΠΛΗΘΥΣΜΩΝ ΠΟΥ ΑΠΑΡΤΙΖΟΥΝ ΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΕΓΚΕΦΑΛΙΚΟ ΙΣΤΟ.ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΑ,ΜΕ ΑΝΟΣΟΙΣΤΟΧΗΜΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΥΣΑΝΙΧΝΕΥΣΑΜΕ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ :(Α)ΝΕΥΡΩΝΩΝ,ΣΧΗΜΑΤΙΖΟΝΤΩΝ ΣΥΝΑΠΤΙΚΑ ΔΙΚΤΥΑ (Β)ΑΣΤΡΟΚΥΤΤΑΡΩΝ,ΤΟΣΟ ΙΝΩΔΩΝ ΟΣΟ ΚΑΙ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΩΝ (Γ)ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΑΣ,ΑΝΑΓΝΩΡΙΖΟΜΕΝΗΣ ΑΠΟ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΤΟΥ ΑΝΤΙΓΟΝΟΥ CD68 ΚΑΙ ΤΕΛΟΣ (Δ)ΟΛΙΓΟΔΕΝΔΡΟΚΥΤΤΑΡΩΝ.ΕΝ ΣΥΝΕΧΕΙΑ ΑΠΟΜΟΝΩΣΑΜΕ ΤΟΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟ ΠΛΗΘΥΣΜΟ ΤΩΝ ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΩΝ,ΒΑΣΙΖΟΜΕΝΟΙ ΣΤΗΝ ΠΡΩΙΜΗΑΥΞΗΜΕΝΗ ΠΡΟΣΚΟΛΛΗΤΙΚΟΤΗΤΑ ΑΥΤΩΝ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΕ ΣΧΕΣΗ ΜΕ ΤΟΥΣ ΑΛΛΟΥΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟΥΣ ΠΛΗΘΥΣΜΟΥΣ.ΟΙ ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΑΚΕΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΠΟΥ ΑΝΑΠΤΥΞΑΜΕ ΑΠΟ ΥΛΙΚΟ ΑΥΤΟΨΙΑΣ ΒΡΕΦΟΥΣ ΗΛΙΚΙΑΣ 1,5 ΜΗΝΩΝ ΗΤΑΝ ΑΜΙΓΕΙΣ ΜΕ ΠΡΟΣΜΙΞΗ ΑΠΟ ΑΣΤΡΟΚΥΤΤΑΡΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΜΙΚΡΟΤΕΡΗ ΤΟΥ 1% ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΑΝΟΣΟΙΣΤΟΧΗΜΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΝ 8Η ΗΜΕΡΑ IN VITRO.ΤΑ ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΑΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΕΦΕΡΑΝ ΤΟΝ ΛΥΣΟΣΩΜΙΑΚΟ ΔΕΙΚΤΗ CD68,ΚΑΙ ΣΕ ΜΙΚΡΟΤΕΡΟΒΑΘΜΟ ΕΞΕΦΡΑΖΑΝ ΚΑΙ ΤΟΝ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΤΗΣ ΕΝΔΟΤΟΞΙΝΗΣ(ΨΔ14).ΣΕ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΜΕ FACS ΕΜΦΑΝΙΣΤΗΚΕ ΕΝΑΣ ΑΜΙΓΗΣ ΠΛΗΘΥΣΜΟΣ ΜΕ ΥΨΗΛΗ ΚΟΚΚΙΩΤΗΤΑ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΑΥΤΟΦΘΟΡΙΣΜΟ ΤΟΣΟ ΣΤΟ ΕΡΥΘΡΟ ΟΣΟ ΚΑΙ ΣΤΟ ΠΡΑΣΙΝΟ ΦΑΣΜΑ.ΑΚΟΛΟΥΘΩΣ ΜΕΛΕΤΗΣΑΜΕ ΤΗΝ ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΑΥΞΗΤΙΚΟΥ ΠΑΡΑΓΟΝΤΑ GM-CSF ΣΤΙΣ ΜΙΚΡΟΓΛΟΙΑΚΕΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ.(ΑΠΟΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)