ΣΥΣΧΕΤΙΣΗ ΤΗΣ ΓΟΝΟΤΥΠΙΚΗΣ ΜΕ ΤΗΝ ΦΑΙΝΟΤΥΠΙΚΗ ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΑ ΣΕ ΑΤΟΜΑ ΠΟΥ ΠΑΣΧΟΥΝ ΑΠΟ ΕΝΔΙΑΜΕΣΗ Β - ΜΕΣΟΓΕΙΑΚΗ ΑΝΑΙΜΙΑ

Abstract

WE STUDIED 12 PATIENTS BETWEEN 12 TO 70 YEARS OF AGE, WHOSE CLINICAL/ HAEMATOLOGICAL PICTURE IS COMPATIBLE WITH Β - THALASSAEMIA INTERMEDIA PHENOTYPE. THE PHENOTYPIC HETEROGENEITY OF THESE PATIENTS IS ALSO REVEALED BY THE DATA ON THEIR ABILITY TO PRODUCE Β - GLOBIN CHAINS, AS THIS IS MEASURED WITH THE BIOSYNTHETIC RATIO OF NON Α:Α GLOBIN CHAINS. THE BIOSYNTHETIC RATIO IS MEASURED BY EXPERIMENTS OF IN VITRO SYNTHESIS OF GLOBIN CHAINS IN THE RETICULOCYTES OF THE PATIENTS, BY USING ^3H - LEUCINE. THE GENOTYPE OF THE PATIENTS WAS DETERMINED,PRIMARELY BY THE DETECTION OF THE EXACT NATURE OF THE Β - THALASSAEMIA MUTATION INVOLVED. THIS WAS CARRIED OUT BY DOT - BLOT HYBRIDIZATION, OF THE APPROPRIATE DNA FRAGMENT, AMPLIFIED FROM THE Β - GLOBIN GENE BY POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) AND THE USE OF ALLELE SPECIFIC, RADIOACTIVE OLIGONUCLEOTIDES (ASO). THE DERERMINATION OF THE GENOTYPE INVOLVED A NUMBER OF OTHER GENETIC PARAMETERS AS ARE THE DNA HAPLOTYPE IN EACH Β - THALASSAEMIA MUTATION RESIDES AND FUNCTIONS, POSSIBLE GENETIC REARRANGEMENTS WITHIN THE GLOBIN GENES AND THE COINHERITANCE OF Α - THALASSAEMIA OF HPFH SYNDROMES OR ΔΒ - THALASSAEMIA. THE LATTER WERE CARRIED OUT BY SOUTHERN BLOT ANALYSIS OR /AND WITH PCR AND RESTRICTION ENZYME DIGESTS OF THE PRODUCTS. IN SOME CASES DNA SEQUENCING WAS CARRIED OUT IN ORDER TO DETERMINE NEW Β - THALASSAEMIA MUTATIONS. IN OUR STUDY IT WASFOUND THAT IN FOUR CASES A DIRECT CORRELATION BETWEEN PHENOTYPE AND GENOTYPEWAS POSSIBLE, BECAUSE THE MILD NATURE OF Β - THALASSAEMIA MULTATION INVOLVED, ALLOWED (ABSTRACT TRUNCATED)

ΣΤΗΝ ΕΡΓΑΣΙΑ ΑΥΤΗ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ 12 ΑΤΟΜΑ ΗΛΙΚΙΑΣ ΑΠΟ 12 ΕΩΣ 70 ΕΤΩΝ, ΤΩΝ ΟΠΟΙΩΝ Η ΚΛΙΝΙΚΗ/ΑΙΜΑΤΟΛΟΓΙΚΗ ΤΩΝ ΕΙΚΟΝΑ ΗΤΑΝ ΣΥΜΒΑΤΗ ΜΕ ΦΑΙΝΟΤΥΠΟ ΕΝΔΙΑΜΕΣΗΣ Β - ΘΑΛΑΣΣΑΙΜΙΑΣ. Η ΦΑΙΝΟΤΥΠΙΚΗ ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΑ ΜΕΤΑΞΥ ΤΩΝ ΠΑΣΧΟΝΤΩΝ ΤΗΣ ΠΑΡΟΥΣΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ,ΑΝΤΙΚΑΤΟΠΤΡΙΖΕΤΑΙ, ΣΤΗΝ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΤΟΥΣ ΝΑ ΣΥΝΘΕΤΟΥΝ ΑΛΥΣΙΔΕΣ ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ. ΗΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΤΟΥΣ ΑΥΤΗ ΕΚΤΙΜΗΘΗΚΕ ΜΕΣΩ ΤΟΥ ΒΙΟΣΥΝΘΕΤΙΚΟΥ ΤΟΥΣ ΛΟΓΟΥ, Ο ΟΠΟΙΟΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ ΜΕ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ IN VITRO ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΤΩΝ ΣΦΑΙΡΙΝΙΚΩΝ ΑΛΥΣΙΔΩΝ ΣΤΑ ΔΥΚΤΙΟΕΡΥΘΡΟΚΥΤΤΑΡΑ ΚΑΘΕΝΟΣ ΑΤΟΜΟΥ, ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΗ ^3Η - ΛΕΥΚΙΝΗΣ. Ο ΕΝΔΙΑΜΕΣΟΣ ΘΑΛΑΣΣΑΙΜΙΚΟΣ ΓΟΝΟΤΥΠΟΣ ΓΙΑ ΚΑΘΕ ΠΑΣΧΟΝΤΑ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ ΑΠΟ ΤΙΣ ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΙΣ Β - ΘΑΛΑΣΣΑΙΜΙΑΣ, ΤΟΝ ΑΠΛΟΤΥΠΟ, ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ ΑΛΛΩΝ ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΩΝ Η ΑΝΑΚΑΤΑΤΑΞΕΩΝ ΣΤΑ ΓΟΝΙΔΙΑ, ΠΟΥ ΣΥΝΙΣΤΟΥΝ ΤΟ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ Β Η/ΚΑΙ Α, ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ Η ΟΧΙ ΣΥΝΔΡΟΜΟΥ HPFH Η ΔΒ - ΘΑΛΑΣΣΑΙΜΙΑΣ. Ο ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ Β - ΘΑΛΑΣΣΑΙΜΙΚΩΝ ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΩΝ ΕΓΙΝΕ ΜΕ ΥΒΡΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΖΕΥΓΩΝ ΟΛΙΓΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΩΝ ΕΙΔΙΚΩΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΟ ΑΛΛΗΛΟΜΟΡΦΟ ΚΑΙ ΡΑΔΙΟΣΗΜΑΣΜΕΝΩΝ ΜΕ ^32P ΕΠΙ ΤΟΥ ΕΝΙΣΧΥΜΕΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ DNA ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ Β ΚΑΘΕ ΑΤΟΜΟΥ ΜΕ ΑΛΥΣΙΔΩΤΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΠΟΛΥΜΕΡΑΣΗΣ (PCR). ΣΕ ΟΡΙΣΜΕΝΕΣ ΠΕΡΙΠΤΩΣΕΙΣ ΗΤΑΝ ΑΝΑΓΚΑΙΟΣ Ο ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΤΟΥ DNA ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ Β. ΟΙ ΑΠΛΟΤΥΠΟΙ ΤΟΥ DNA ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ Ο ΕΛΕΓΧΟΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ ΑΝΑΚΑΤΑΤΑΞΕΩΝ ΣΤΑ ΓΟΝΙΔΙΑ ΠΟΥ ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΤΟ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ Β ΚΑΙ Α ΕΓΙΝΕ ΜΕ ΑΝΑΛΥΣΗ ΚΑΤΑ SOUTHERN, ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΜΕ ΕΝΙΣΧΥΣΗ ΤΜΗΜΑΤΟΣ DNA ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ Β ΜΕ PCR ΚΑΙ ΚΑΤΑΤΜΗΣΗ ΤΩΝ ΠΡΟΙΟΝΤΩΝ ΑΥΤΩΝ ΜΕ ΕΝΖΥΜΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΥ. ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΣΕ ΟΡΙΣΜΕΝΕΣ ΠΕΡΙΠΤΩΣΕΙΣ ΕΝΑΣ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΟΣ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)