In vitro & in vivo μελέτη της επίδρασης του αναστολέα της SRC τυροσινικής κινάσης Dasatinib και του χημειοθεραπευτικού ντοσεταξέλη σε πειραματικά μοντέλα Triple-negative καρκίνου του μαστού

Abstract

BACKROUND: The term “triple-negative breast cancer” (TNBC) is used to identifythe approximately 15% of breast cancers that lack expression of estrogen receptor (ER)and progesterone receptor (PR) and do not show amplification of the human epidermalgrowth factor receptor 2 (HER2) gene. TNBCs are a heterogeneous group of tumorswith one common feature: a distinctly aggressive nature with higher rates of relapseand shorter overall survival in the metastatic setting compared to other subtypes ofbreast cancer. To date, not a single targeted therapy has been approved for the treatmentof TNBC, and cytotoxic chemotherapy remains the standard treatment. OBJECTIVE: The experimental study of the effects of the chemotherapeutic docetaxeland the bcr/abl kinase inhibitor dasatinib on triple- negative breast cancer cell lines (invitro) and on TNBC tumor xenograft mouse models (in vivo). MATERIALS AND METHODS: TNBC cell lines were cultivated and treated withvarious concentrations of docetaxel and dasatinib (5 nM to 100nM). Cell death andapoptosis were studied by flow cytometry. TNBC cell lines were then injected inBALB/c athymic nude mice to express the tumor in vivo. Four groups of mice werecreated (group A: Control, group B: DOC, group C: DAS, group D: DOC + DAS) andtreated respectively with the drugs and their combination. Tumors were obtained,maintained in formaldehyde solution of 10%, embedded in paraffin and sent for furtherhistological evaluation (hematoxylin- eosin staining and immune-histochemicalanalysis) to assess the tumor growth inhibition. RESULTS: The cytotoxic effects of docetaxel seem to be statistically important, withlittle effect on apoptosis. The effect of dasatinib in vitro and vivo is statisticallyimportant, in terms of apoptosis and tumor reduction, with little adverse effects. CONCLUSION: TNBC is a difficult to treat oncologic condition, even in theexperimental setting. Promising results concerning the addition of targeted therapies(dasatinib) to the conventional cytotoxic ones (docetaxel) have been shown, awaitingfurther evaluation.

ΕΙΣΑΓΩΓΗ: Ο όρος «Τριπλά- Αρνητικός Καρκίνος του Μαστού (TNBC) αναφέρεταιστο περίπου 15% των καρκίνων του μαστού που στερούνται της έκφρασης τωνοιστρογονικών (ER) και προγεστερονικών υποδοχέων (PR) και δεν εμφανίζουνέκφραση του γονιδίου του υποδοχέα του ανθρώπινου επιδερμικού αυξητικούπαράγοντα 2 (HER2). Ο TNBC αποτελεί μια ετερογενή ομάδα όγκων με ένα κοινόχαρακτηριστικό: μια επιθετική φύση με υψηλότερα ποσοστά υποτροπής και βραχύτερησυνολική επιβίωση σε σύγκριση με άλλους υποτύπους καρκίνου του μαστού. Έως καισήμερα, δεν έχει εγκριθεί κάποια στοχευμένη θεραπεία για τον TNBC, με τηνκυτταροτοξική χημειοθεραπεία να αποτελεί τη βασική θεραπεία. ΣΚΟΠΟΣ: Η πειραματική μελέτη της επίδρασης του χημειοθεραπευτικού ντοσεταξέληκαι του αναστολέα κινασών bcr/abl δασατινίμπη σε κυτταρικές σειρές Τριπλά-Αρνητικού Καρκίνου του Μαστού (in vitro), καθώς και σε πειραματικά μοντέλαποντικών που προσβλήθηκαν από τον TNBC (in vivo). ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ: Κυτταρικές σειρές TNBC καλλιεργήθηκαν και χορηγήθηκανσε αυτές διάφορες συγκεντρωσεις ντοσεταξέλης και δασατινίμπης (από 5 nM έως100nM). Ο κυτταρικός θάνατος και η απόπτωση μελετήθηκαν με την τεχνική τηςκυτταρομετρίας ροής. Οι κυτταρικές σειρές TNBC εν συνεχεία ενοφθαλμίστηκαν σεBALB/c άτριχα αθυμικά ποντίκια για έκφραση του όγκου in vivo. Τα ζώα τουεργαστηρίου χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες (group A: Control, group B: DOC, groupC: DAS, group D: DOC + DAS) και θεραπεύτηκαν αντίστοιχα με τους παραπάνωφαρμακευτικούς παράγοντες και τους συνδυασμούς τους. Οι όγκοι αφαιρέθηκαν,συντηρήθηκαν σε διάλυμα φορμαλδεΰδης 10%, τοποθετήθηκαν σε παραφφίνη καιστάλθηκαν για περαιτέρω ιστολογική αξιολόγηση (χρώση αιματοξυλίνης- εωσίνης καιανοσοϊστοχημική ανάλυση) για εκτίμηση της αναστολής εξέλιξης του όγκου. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ: Η ντοσεταξέλη έχει σημαντική επίδραση στην αναστολήκυτταρικού πολλαπλασιασμού και την επαγωγή απόπτωσης in vitro, με τακυτταροτοξικά αποτελέσματά της να χρήζουν ιδιαίτερης προσοχής και σημασίας. Ηεπίδραση της δασατινίμπης in vitro κρίνεται στατιστικά σημαντική, στον τομέα τηςαπόπτωσης και της μείωσης (αναστολής κυτταρικού πολλαπλασιασμού) του όγκου, μεαποδεκτό προφίλ ανεπιθύμητων ενεργειών. Στην in vivo πειραματική διαδικασία, ησυνδυασμένη δράση των δύο παραγόντων φαίνεται πως έχει σημαντικό κλινικόόφελος, λαμβάνοντας ταυτόχρονα υπόψη το προφίλ τοξικότητας της ντοσεταξέλης. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ: Ο TNBC είναι μια δύσκολη στη θεραπεία ογκολογική οντότητα,ακόμα και σε πειραματικό επίπεδο. Παρατηρούνται ενθαρρυντικά αποτελέσματα πουαφορούν στην προσθήκη στοχευμένων θεραπειών (δασατινίμπη) στη συμβατικήκυτταροτοξική χημειοθεραπεία (ντοσεταξέλη), τόσο in vitro όσο και in vivo, τα οποίαχρήζουν περαιτέρω αξιολόγησης.