Μελέτη των ιστοπαθολογικών αλλοιώσεων πνευμονικού μοσχεύματος κονίκλου σε συνθήκες θερμής και ψυχρής ισχαιμίας

Abstract

Aim: Rabbit lung models were set up to study hypothermic and cold ischemia. Material and Methods: Twenty-four New Zealand white rabbits were divided in Experimental Groups I and II. Right lungs were assigned to ΔI and ΔII groups (control groups). Left lungs were assigned to AI and AII groups (study groups). After euthanasia, all animals were left untouched for 60 minutes. Group Al undergone an 1 hour of in situ external cooling. Right lungs continued their ex vivo hypothermic ischemia. Group AII lungs were preserved with antegrade flushing using cold Perfadex solution and then continued with in situ external cooling. Sampling was taken at 60, 90 and 120 minutes. Neutrophils and alveolar edema were evaluated by hematoxylin/eosin staining. Immunohistochemistry was done using antibodies to CD68, CD4 and CD8.Results: No infiltration of PMNs was observed. The AMs increased in number between 60 and 120 minutes ΔI and ΔII groups (p = 0,001). A difference was seen between ΔII and AII groups at 120 minutes (p = 0,014). TCD4 + cells were reduced in number in ΔI and ΔII groups at 90 minutes (p = 0,007 and p = 0,001 respectively). In AI and AII groups TCD4 + decreased at 120 minutes (p = 0,011 and p = 0,001 respectively). Cold ischemia significantly increased TCD8 + cell number after 90 minutes. The TCD4+/TCD8+ ratio differed between ΔI and AI groups at 120 minutes (p = 0,004), while it differed between ΔII and AII groups at 90 minutes (p = 0,030).Conclusions: There was no neutrophil infiltration up to 120 minutes. The AMs increased significantly in hypothermic ischemia. Antegrade flushing with cold solution and topical cooling is more effective than topical cooling alone in reducing the AMs. TCD8+ were affected after 30 minutes while TCD4 + after 60 min of cold ischemia. The TCD4+/TCD8+ ratio changed after 1 hour of in situ external cooling, while 30 minutes were needed for antegrade flushing to change it. The TCD4+ cells orchestrate inflammatory response in hypothermic ischemic damage. The TCD8+ cells undertake during cold ischemia.

Σκοπός: Συστάθηκαν πνευμονικά μοντέλα κονίκλου για να μελετηθεί η υποθερμική και ψυχρή ισχαιμία. Υλικό και Μέθοδος: Εικοσιτέσσερα λευκά κουνέλια Νέας Ζηλανδίας μοιράστηκαν στις Πειραματικές Ομάδες Ι και ΙΙ. Οι δεξιοί πνεύμονες καταχωρήθηκαν στις ομάδες ΔΙ και ΔΙΙ (ομάδες ελέγχου). Οι αριστεροί πνεύμονες αποτελούσαν τις ομάδες ΑI και ΑII (ομάδες μελέτης). Μετά την ευθανασία, τα ζώα έμειναν ανέπαφα για 60 λεπτά. Η ομάδα ΑI υπέστη 1 ώρα τοπικής εξωτερικής ψύξης. Οι δεξιοί πνεύμονες συνέχισαν ex vivo υποθερμική ισχαιμία. Η ομάδα ΑII συντηρήθηκε με ορθόδρομη έκπλυση με κρύο διάλυμα Perfadex και τοπική εξωτερική ψύξη. Δειγματοληψία έγινε στα 60, 90 και 120 λεπτά. Ουδετερόφιλα και κυψελιδικό οίδημα αξιολογήθηκαν με αιματοξυλίνη/ηωσίνη. Έγινε ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας αντισώματα CD68, CD4 και CD8.Αποτελέσματα: Δε παρατηρήθηκε διήθηση PMNs. Τα AMs αυξήθηκαν σε αριθμό μεταξύ 60 και 120 λεπτών στις ομάδες ΔΙ και ΔΙΙ (p=0,001). Διαφορά υπήρξε μεταξύ των ομάδων ΔII και ΑII στα 120 λεπτά (p=0,014). Τα TCD4+ μειώθηκαν αριθμητικά στις ομάδες ΔI και ΔΙΙ στα 90 λεπτά (p=0,007 και p=0,001 αντίστοιχα). Στις ομάδες ΑI και ΑII μειώθηκαν στα 120 λεπτά (p=0,011 και p=0,001 αντίστοιχα). Η ψυχρή ισχαιμία αύξησε σημαντικά τον αριθμό των TCD8+ μετά τα 90 λεπτά. Το πηλίκο TCD4+/TCD8+ διέφερε μεταξύ των ομάδων ΔΙ και ΑI στα 120 λεπτά (p=0,004), ενώ μεταξύ των ομάδων ΔII και ΑII στα 90 λεπτά (p=0,030). Συμπεράσματα: Δεν έγινε διήθηση ουδετεροφίλων μέχρι τα 120 λεπτά. Τα AMs αυξήθηκαν σημαντικά σε αριθμό στην υποθερμική ισχαιμία. Η ορθόδρομη έκπλυση με ψυχρό διάλυμα και τοπική εξωτερική ψύξη είναι πιο αποτελεσματική από τη τοπική εξωτερική ψύξη στη μείωση των AMs. Τα TCD8+ επηρεάζονται μετά από 30 λεπτά, ενώ τα TCD4+ μετά από 60 λεπτά ψυχρής ισχαιμίας. Το πηλίκο TCD4+/TCD8+ επηρεάζεται μετά από 1 ώρα τοπικής εξωτερικής ψύξης ενώ για τη συντήρηση με έκπλυση χρειάζονται 30 λεπτά. Τα TCD4+ ενορχηστρώνουν τη φλεγμονή στην υποθερμική ισχαιμική βλάβη. Τα TCD8+ αναλαμβάνουν στη ψυχρή ισχαιμία.