Μελέτη της μετανάστευσης και της δραστηριότητας των ινοβλαστών του επιτένοντα μετά από διατομή και συρραφή καμπτήρα τένοντα

Abstract

Purpose: The study on fibroblast migration from epitendon, and on proliferation of tendon cells under conditions that simulate reality, meaning, after complete incision and suturing the tendon with modified Kessler technique.Method: 72 New Zealand rabbits, 12-18 months old, were divided randomly at 2 equal groups A and B. In group A epitendon’s fibroblast migration was studied after marking the cells with Dil fluorescent dye. In group B the metabolic activity of tendon cells around the healing area was studied with immunofluorescent dyes.The flexor digitorum profundus tendon of right anterior leg was pulled out of its sheath, incised and sutured with modified Kessler. At 36 rabbits (group A) is stained with the dye Dil (1,1΄- dioctadecyl -3,3,3΄,3΄-tetramethylindocarbocyanine percholate) and is placed back to its sheath, and is fixed distally with a simple Kessler . The left anterior leg was used as control and no tendon laceration was done although it was stained with Dil. At the remaining 36 rabbits (group B) no dye was used during the operation. Specimens were carried athistopathology laboratory and dyed with immunofluoroscent dyes Ki-67, CD-68, EGF-R, anti-P53. Tendon specimens were taken from 5 rabbits each period and examined under fluorescence microscopy at 1, 3, 5, 7, 14, 28, 42 days postoperatively and from 1 rabbit at day 84 as a pilot case. At group A stained fibroblast migration was studied under fluorescent light microscopy, while at group B the metabolic activity of tendon cells was studied with immunochemical dyes for each time period.Results: In order to study the vital dye Dil, fibloblast migration was divided to four phases: 1) all stained cells at tendon’s surface, 2) scattered migration under tendon’s surface, 3) thorough migration under tendon’s surface, 4) deeper in edotendon.The majority of epitendon’s fibroblasts was found to be in first phase at 24hrs, in third phase at 3rd day, while, since 5th day was at the fourth phase.At group B indicative uptake of immunofluoroscent dyes from epitendon and endotendon cells was studied. Increased uptake of Ki-67, CD-68, EGF-R was found at epitendon since first days and from 5th day in endotendon. Cell apoptosis (anti-P53) was found in endotendon during the first two weeks.Conclusions: There is direct activation of epitendon’s fibroblasts. The migration starts early in the first day and peaks under tendon’s surface at the third day, and later deeper in the endotendon. The responsible cells for healing are gathered firstly on the epitendon and in the incision area, and proliferate faster than in the endotendon, where they die at first two weeksfor no specified reason.

Σκοπός: Η μελέτη της μετανάστευσης των ινοβλαστών του επιτένοντα και τηςδραστηριότητας των κυττάρων του τένοντα, σε συνθήκες που προσομοιάζουν με τηνπραγματικότητα, δηλαδή, μετά από πλήρη διατομή και συρραφή του καμπτήρα τένοντα με τροποποιημένη Kessler.Μέθοδος: 72 κόνικλοι Νέας Ζηλανδίας, 12-18 μηνών, χωριστήκανε τυχαία από 36 σε 2 κατηγορίες Α και Β. Στην Α μελετήθηκε η μετανάστευση των ινοβλαστών του επιτένοντα κατόπιν χρώσης αυτών με τη φθορίζουσα χρωστική Dil και στη Β μελετήθηκε με ανοσοϊστοχημικές χρωστικές η δραστηριότητα των κυττάρων της υπο επούλωση περιοχής.Στο δεξιό πρόσθιο άκρο ο εν τω βάθει καμπτήρας τένοντας σύρεται εκτός του ελύτρου, διατέμνεται και συρράφεται με τροποποιημένη Kessler. Σε 36 από αυτούς (ομάδα Α) εμποτίζεται με τη χρωστική Dil (1,1΄- dioctadecyl -3,3,3΄,3΄-tetramethylindocarbocyaninepercholate) και επανατοποθετείται εντός του ελύτρου όπου και καθηλώνεται περιφερικά με τη στηρικτική Kessler. Το Αρ πρόσθιο άκρο χρησιμοποιήθηκε ως μόσχευμα ελέγχου χωρίς διατομή του καμπτήρα αλλά βάφτηκε με τη χρώση Dil. Στους άλλους 36 (ομάδα Β) δε χρησιμοποιείται διεγχειρητικά καμία χρώση. Τα δείγματα μεταφέρονται σε ιστοπαθολογικόεργαστήριο όπου και βάφονται με τις ανοσοϊστοχημικές χρωστικές Ki-67, CD-68, EGF-R, anti-P53. Τα ιστοτεμάχια από 5 κόνικλους λαμβάνονται και εξετάζονται σε μικροσκόπιο φθορισμού 1,3,5,7,14,28,42 ημέρες μετεγχειρητικά και 1 κόνικλος την 84η ημέρα πιλοτικά.Στην Α ομάδα μελετήθηκε η μετανάστευση των μαρκαρισμένων με Dil ινοβλαστών κάτω από φθορίζον μικροσκόπιο, ενώ στη Β ομάδα μελετήθηκε η μεταβολική δραστηριότητα των κυττάρων της περιοχής με ανοσοϊστοχημικές μεθόδους για όλες τις χρονικές περιόδους.Αποτελέσματα: Προκειμένου να μελετηθεί η χρωστική Dil, η μετανάστευση τωνινοβλαστών χωρίστηκε σε 4 φάσεις: 1) όλα τα βαμμένα κύτταρα στην επιφάνεια του τένοντα, 2) σποραδική μετανάστευση κάτω από την επιφάνεια του τένοντα, 3) αθρόα μετανάστευση κάτω από την επιφάνεια του τένοντα, 4) βαθύτερα στον ενδοτένοντα. Διαπιστώθηκε ότι η συντριπτική πλειονότητα των ινοβλαστών του επιτένοντα βρίσκεται στην 1η φάση από τοπρώτο 24ωρο, στην 3η φάση κατα την 3η ημέρα, ενώ από την 5ημέρα και μετά στην 4η φάση.Στη Β ομάδα μελετήθηκε η ενδεικτική πρόσληψη των ανοσοϊστοχημικών χρώσεων από τα κύτταρα στον επιτένοντα και στον ενδοτένοντα. Παρατηρήθηκε αυξημένη πρόσληψη Ki-67, CD-68, EGF-R από τις πρώτες ημέρες στον επιτένοντα και από την 5η ημέρα στον ενδοτένοντα. Απόπτωση των κυττάρων (anti-P53) διαπιστώθηκε στον ενδοτένοντα τις πρώτες δύο εβδομάδες.Συμπεράσματα: Η ενεργοποίηση των ινοβλαστών του επιτένοντα είναι άμεση. Ημετανάστευσή τους ξεκινά νωρίς από την 1η ημέρα και κορυφώνεται κάτω από τονεπιτένοντα από την 3η ημέρα, ενώ βαθύτερα στον ενδοτένοντα αργότερα. Τα κύτταραυπεύθυνα για την επούλωση αναπτύσσονται αρχικά στον επιτένοντα και στην περιοχή της τομής και πολλαπλασιάζονται πιο γρήγορα απ’ότι στον ενδοτένοντα όπου και αποπίπτουν τις πρώτες δύο εβδομάδες για αδιευκρίνιστο λόγο__