ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΦΥΣΙΚΩΝ ΚΑΙ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΠΑΓΚΡΕΑΤΙΚΗΣ ΛΙΠΑΣΗΣ

Abstract

ΣΤΟ ΠΡΩΤΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΚΑΘΑΡΙΣΤΗΚΕ Η ΠΑΓΚΡΕΑΤΙΚΗ ΛΙΠΑΣΗ ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ ΑΠΟ ΣΚΟΝΗ ΑΚΕΤΟΝΗΣ ΠΑΓΚΡΕΑΤΟΣ ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ. Η ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ ΠΕΡΙΕΛΑΜΒΑΝΕ ΤΑ ΕΞΗΣ ΣΤΑΔΙΑ: ΕΚΧΥΛΙΣΗ ΤΗΣ ΛΙΠΟΛΥΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΑΠΟ ΤΗΝ ΑΚΕΤΟΝΙΚΗ ΣΚΟΝΗ, ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΣΕ ΣΤΗΛΗ CM 52, ΚΑΤΑΒΥΘΙΣΗ ΜΕ ΘΕΙΙΚΟ ΑΜΜΩΝΙΟ, ΚΑΙ ΔΙΑΔΟΧΙΚΑ ΣΤΑΔΙΑΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑΣ ΣΕ ΣΤΗΛΕΣ ULTROGEL ACA 44, PHENYL-SEPHAROSE, OCTYL- SEPHAROSE ΚΑΙ DE 52. Η ΠΑΓΚΡΕΑΤΙΚΗ ΛΙΠΑΣΗ ΠΟΥ ΚΑΘΑΡΙΣΤΗΚΕ ΜΕ ΤΗΝ ΠΑΡΑΠΑΝΩ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΧΕΙ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ 46 KD ΚΑΙ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΟ ΣΗΜΕΙΟ 6,4. Η ΛΙΠΟΛΥΣΗ ΡΥΘΜΙΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΑΜΦΙΦΙΛΩΝ ΕΝΩΣΕΩΝ, ΟΠΩΣ ΤΑ ΧΟΛΙΚΑ ΑΛΑΤΑ ΚΑΙ Η ΛΕΚΙΘΙΝΗ, ΠΟΥ ΠΡΟΣΡΟΦΟΥΝΤΑΙ ΣΤΗ ΔΙΕΠΙΦΑΝΕΙΑ ΤΡΙΓΛΥΚΕΡΙΔΙΟΥ/ΝΕΡΟΥ. Η ΚΑΤΑΝΟΜΗ ΤΩΝ ΧΟΛΙΚΩΝ ΑΛΑΤΩΝ ΜΕΤΑΞΥ ΤΗΣ ΛΙΠΙΔΙΚΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ ΥΔΑΤΙΚΗΣ ΦΑΣΗΣ ΕΙΝΑΙ ΠΡΩΤΑΡΧΙΚΗΣ ΣΗΜΑΣΙΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΚΔΗΛΩΣΗ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ. Η ΛΙΠΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ ΩΣ ΣΥΝΑΡΤΗΣΗ ΔΙΑΦΟΡΩΝ ΣΥΝΔΥΑΣΜΩΝ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΩΝ ΔΕΟΞΥΧΟΛΙΚΟΥ ΚΑΙ ΔΙΠΑΛΜΙΤΟΥΛΦΩΣΦΑΤΙΔΥΛΟΧΟΛΙΝΗΣ. ΑΠΟ ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ Ζ-ΔΥΝΑΜΙΚΟΥ ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΟΤΙ Η ΛΕΚΙΘΙΝΗ ΕΠΗΡΕΑΖΕΙ ΤΗΝ ΚΑΤΑΝΟΜΗ ΤΩΝ ΧΟΛΙΚΩΝ, ΠΙΘΑΝΟΤΑΤΑ ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΟΝΤΑΣ ΜΟΡΙΑ ΔΕΟΞΥΧΟΛΙΚΟΥ ΑΠΟ ΤΗΝ ΔΙΕΠΙΦΑΝΕΙΑ. ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΜΑΣ ΥΠΟΔΕΙΚΝΥΟΥΝ ΟΤΙ Η ΛΕΚΙΘΙΝΗ ΔΡΑ ΣΥΝΕΡΓΙΣΤΙΚΑ ΜΕ ΤΑ ΧΟΛΙΚΑ ΑΛΑΤΑ ΣΥΜΜΕΤΕΧΟΝΤΑΣ ΣΤΗ ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΜΙΚΤΩΝ ΜΙΚΥΛΛΙΩΝ. Η ΠΑΡΑΤΗΡΟΥΜΕΝΗ ΤΕΛΙΚΑ ΛΙΠΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΕΞΑΡΤΑΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟΝ ΛΟΓΟ ΤΩΝ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΩΝΧΟΛΙΚΟΥ ΑΛΑΤΟΣ ΠΡΟΣ ΛΕΚΙΘΙΝΗ: ΧΑΜΗΛΟΙ ΛΟΓΟΙ ΕΝΙΣΧΥΟΥΝ ΤΗΝ ΛΙΠΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΕΝΩ ΥΨΗΛΟΥ ΛΟΓΟΙ ΟΔΗΓΟΥΝ ΣΕ ΑΝΑΣΤΟΛΗ. (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

IN THE FIRST PART OF THE THESIS PANCREATIC LIPASE IS PURIFIED FROM RABBIT PANCREAS ACETON POWDER. THE PURIFICATION PROCEDURE CONSISTS OF THE FOLLOWING STEPS: EXTRACTION OF LIPOLYTIC ACTIVITY FROM ACETON POWDER, COLUMN CHROMATOGRAPHY ON CM 52, PRECIPITATION WITH AMMONIUM SULPHATE AND SEQUENTIAL COLUMN-CHROMATOGRAPHY STEPS ON ULTROGEL ACA 44, PHENYL-SEPHAROSE, OCTYL-SEPHAROSE AND DE 52. THE PURIFIED PANCREATIC LIPASE EXHIBITS MOLECULAR MASS OF 46 KD AND ISOELECTRICPOINT AROUND 6,4. LIPOLYSIS IS REGULATED BY THE PRESENCE OF AMPHIPHILIC COMPOUNDS SUCH AS BILE SALTS AND LECITHIN, WHICH ARE ADSORBED AT THE TRIGLYCERIDE/WATER INTERFACE. THE PARTITION OF BILE SALTS BETWEEN THE LIPIDIC AND THE AQUEOUS PHASE IS OF PRIME IMPORTANCE IN THE EXPRESSION OF LIPASE ACTIVITY. LIPASE ACTIVITY WAS DETERMINED AS A FUNCTION OF DIFFERENT COMBINATIONS OF CONCENTRATIONS OF DEOXYCHOLATE AND DIPALMITOYLPHOSPHATIDYLCHOLINE. FROM Ζ-POTENTIAL MEASUREMENTS IT IS EVIDENT THAT LECITHIN AFFECTS THE PARTITION OF BILE SALTS, MOST PROBABLY BY DISPLACING DEOXYCHOLATE MOLECULES. OUR RESULTS INDICATE THAT LECITHIN EXERTS A SYNERGISTIC EFFECT WITH BILE SALTS, PROBABLY VIA THE FORMATION OF MIXED MICELLES. THE FINAL EFFECT ON LIPOLYSIS DEPENDS ON THE RATIO OF BILE SALTS TO LECITHIN: LOW RATIOS ENHANCE ENZYME ACTIVITY, WHILE HIGH RATIOS LEAD TOINHIBITION. (ABSTRACT TRUNCATED)