Ο ρόλος του μικροπεριβάλλοντος του μυελού των οστών στα μυελοϋπερπλαστικά σύνδρομα

Abstract

Both IL-8 and OPG have been implicated in the pathogenesis and clinical manifestations of myelofibrosis (MF), the most severe Ph(-) MPD. IL-8 and its receptors were reported to promote altered megakaryocyte (MGK) growth (Emadi et al), a typical MF finding, while OPG was found upregulated in endothelial cells (Bock et al). Τhe aims of this thesis are too evaluate the expression and intensity IL-8 and OPG immunostaining in BM biopsy of MPD patients at diagnosis and to study any eventual correlations between them and clinical characteristics or outcome.78 patients were studied, diagnosed with MPN from 1984 to 2012 with a median follow up period of 55 months. Median age was 65 years, 49 were males. 22% were diagnosed with polycythemia vera (PV), 42% with essential thrombocytosis (ET) and 36% with MF. Of those, 58% had splenomegaly, 8% had bone pain, 81% presented with fatigue, 9% had sweating, 11.5% experienced a thrombotic event, 5% lost weight and 77% were JAK2 positive. Caryotype was abnormal in 32% while 7% presented unfavourable caryotype findings. Immunostaining for IL-8 and OPG was performed on paraffin-embedded 4μm sections of formalin fixed BM biopsies, carried out at the time of diagnosis, using the two-step peroxidase conjugated polymer technique. Grade of positivity and Intensity of IL-8 and OPG expression was scored according to a 0 to 3 scale. Statistical analysis was performed conventionally, using the SPSS version 22.0 package, and p values <0.05 were considered significant. There was no significant difference observed concerning the grade of expression of both stainings among the different MPN-groups. High intensity of IL-8 expression in MGK correlated, in the whole cohort, with a high neutrophil count (p=0.029), low lymphocyte count (p=0.026), and increased haemoglobin (p=0.02). OPG was also expressed in cells of myeloid lineage (MLC) and its high intensity in MLC was observed in patients with high platelet counts (p=0.015). High intensity of OPG expression in MGK correlated with high neutrophil counts (p=0.045), high hemoglobin (p=0.045), high platelet counts (p=0.02), and a favourable karyotype (p=0.006). Most importantly, OPG low intensity in MGK correlated with poor survival (p=0.012). There was no correlation found between OPG and bone pain. In Conclusion, οur most important finding is that high intensity of OPG expression in MGK correlated with increased survival and a favourable karyotype in patients with MPDs (PV, ET and MF). To the best of our knowledge, this finding has not been reported yet. It should indeed be further validated.

Τόσο η IL-8 όσο και η OPG εμπλέκονται στην παθογένεση και τις κλινικές εκδηλώσεις της Μυελοΐνωσης που αποτελεί το Ph-αρνητικό ΜΥΝ με τη βαρύτερη εικόνα. Έχει αναφερθεί ότι η IL-8 και οι υποδοχείς της προάγουν την παθολογική αύξηση των μεγακαρυοκυττάρων (ΜΓΚ) (Emadi et al. IL-8 and its CXCR1 and CXCR2 receptors participate in the control of megakaryocytic proliferation, differentiation, and ploidy in myeloid metaplasia with myelofibrosis. Blood. 2005;105(2):464-73) ενώ είναι γνωστό ότι η OPG βρέθηκε αυξημένη σε ενδοθηλιακά κύτταρα (Bock et al. Osteosclerosis in advanced chronic idiopathic myelofibrosis is associated with endothelial overexpression of osteoprotegerin. Br J Haematol. 2005;130(1):76-82). Σκοπός αυτής της διατριβής, είναι η μελέτη της έκφρασης και έντασης ανοσοιστοχημικών χρώσεων IL-8 και OPG σε ΟΜΒ ασθενών με ΜΥΝ κατά τη διάγνωσή τους καθώς και των πιθανών συσχετισμών των παραπάνω με κλινικά χαρακτηριστικά και πρόγνωση. Μελετήθηκαν αναδρομικά 78 ασθενείς με ΜΥΣ που διαγνώστηκαν μεταξύ 1984 και 2012, με διάμεσο χρόνο παρακολούθησης 55 μηνών. Η διάμεση ηλικία τους ήταν 65 έτη, 49 εξ΄αυτών ήταν άνδρες. Το 22% είχαν διάγνωση Αληθούς Πολυκυτταραιμίας (ΑΠ), 42% είχαν Ιδιοπαθή Θρομβοκυττάρωση (ΙΘ) και 36% είχαν Μυελοΐνωση (ΜΙ). Στο σύνολο των ασθενών, 58% παρουσίαζαν σπληνομεγαλία, 8% είχαν οστικά άλγη, 81% παρουσίαζαν κόπωση, 9% είχαν εφιδρώσεις, 12% εμφάνισαν κάποιο θρομβωτικό επεισόδιο, 5% ανέφεραν απώλεια βάρους ενώ 77% ήταν θετικοί για τη μετάλλαξη JAK2. Ο καρυότυπος ήταν παθολογικός στο 32%, ενώ το 7%παρουσίαζε καρυοτυπικά ευρήματα δυσμενούς πρόγνωσης. Οι ανοσοιστοχημικές χρώσεις για την IL-8 και την OPG, πραγματοποιήθηκαν σε τομές παραφίνης 4μm των οστεομυελικών βιοψιών της διάγνωσης με τη μέθοδο δύο φάσεων συζευγμένων πολυμερών υπεροξειδάσης. Η ένταση και η θετικότητα της έκφρασης της IL-8 και της OPG μετρήθηκαν σε κλίμακα βαθμονομημένη από 0 έως 3. H στατιστική ανάλυση έγινε με το πρόγραμμα SPSS και στατιστικά σημαντικές θεωρήθηκαν οι τιμές του p < 0,05. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στο βαθμό της έκφρασης των δύο χρώσεων ανάμεσα στα διάφορα ΜΥΣ. Στο σύνολο των ασθενών υψηλή ένταση της έκφρασης της IL-8 στα ΜΓΚ συσχετίσθηκε με πολυμορφοπυρήνωση (p=0,029), λεμφοπενία (p=0,026) και αυξημένη αιμοσφαιρίνη (p=0,02). Η OPG ήταν παρούσα στα κύτταρα της μυελικής σειράς και η υψηλή της ένταση παρατηρήθηκε σε ασθενείς με θρομβοκυττάρωση (p=0,015). Υψηλή ένταση της έκφρασης της OPG, στα ΜΓΚ, συσχετίσθηκε με πολυμορφοπυρήνωση (p=0,045), θρομβοκυττάρωση (p=0,02) και καρυότυπο μη δυσμενούς πρόγνωσης (p=0,006). H χαμηλή ένταση της OPG στα MΓΚ, συσχετίστηκε με πτωχή επιβίωση (p=0,012, Εικ 1). Δε βρέθηκε συσχετισμός μεταξύ OPG και παρουσίας οστικών αλγών. Συνοψίζοντας, το σημαντικότερο εύρημα αυτής της μελέτης ήταν ότι η υψηλή ένταση της έκφρασης της OPG στα MΓΚ συσχετίστηκε με αυξημένη επιβίωση και ευνοικό καρυότυπο σε ασθενείς με ΜΥΝ. Το παραπάνω αποτελεί νέο εύρημα και χρήζει επιβεβαίωσης σε μεγαλύτερη σειρά ασθενών.