Διερεύνηση του ρόλου των φυσικών φονέων Τ κυττάρων στις Gram αρνητικές λοιμώξεις σε διαβητικούς και μη διαβητικούς ασθενείς

Abstract

Natural Killer T cells (ΝΚΤ) recognize glycolipid antigens, combine T cell receptor specificity with natural killer cell surface markers bridging innate with adaptive immunity. NKT cells produce cytokines early during an infection and direct immune response. Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM) is associated with activated innate immunity. Gram negative pathogens activate NKT cells, promote autoimmune reactivity and are frequently responsible for infections in patients with type 2 diabetes.Method: T2DM group consisted of 22 patients, the control group consisted of 22 patients who had not T2DM. All patients were infected from Gram negative bacteria. Physical examination, vital signs were performed and peripheral blood was drown on days three and six of febrile illness for complete blood count, pH, biochemistry, immunoglobulins, antinuclear antibodies, anti dsDNA and blood/urine/pus cultures. Flow cytometry was utilized for ΝΚΤ identification with monoclonal PE CY 5 anti-CD3, FITC anti-CD4, PE anti-NKT TC Receptor. For intracellular staining we utilized Alexa-Fluor anti-IFN-γ and APC anti- IL-4. Parameters were: CD3+NKT+, CD4+NKT+, CD3+IL4+, CD4+IL-4+, CD3+IFNγ+, CD4+IFNγ+, CD3+IL-4+NKT+, CD4+IL-4+NKT+, CD3+IFNγ+NKT+, CD4+IFNγ+ΝΚΤ+. APACHE II system was used to stratify disease severity.Results: NKT cell number and intracellularly produced IFNγ/IL4 are decreasing from day 3 to day 6 in same way in both groups. Following NKT stimulation a mixed type of response (Th1/Th2) is being elicited from CD4+/CD3+ lymphocytes with significant difference in T2DM group on day 3 and significant increase between groups from day 3 to day 6. There is no significant difference between groups concerning immunoglobulins and production of antinuclear antibodies or anti ds DNA.

Τα Natural Killer T cells (ΝΚΤ) αναγνωρίζουν γλυκολιπιδιακά αντιγόνα, εκφράζουν δείκτες επιφανείας φυσικών φονέων και Τ κυτταρικό υποδοχέα, γεφυρώνοντας την φυσική με την ειδική ανοσία. Συμμετέχουν στα πρώιμα στάδια μιας λοίμωξης κατευθύνοντας την ανοσολογική απάντηση. Ο Σακχαρώδης Διαβήτης τύπου 2 (ΣΔ2) θεωρείται κατάσταση ενεργοποιημένης φυσικής ανοσίας. Τα Gram αρνητικά παθογόνα ενεργοποιούν τα NKT κύτταρα, συνδέονται με την αυτοανοσία και είναι συχνά αίτια λοιμώξεων σε ασθενείς με ΣΔ2. Μέθοδος: Η ομάδα ΣΔ2 είχε 22 άτομα , η ομάδα των μαρτύρων είχε 22 άτομα χωρίς ΣΔ2 . Όλοι είχαν λοίμωξη από Gram αρνητικό μικρόβιο. Πραγματοποιήθηκε φυσική εξέταση, λήψη ζωτικών σημείων και περιφερικού αίματος την ημέρα 3 και 6 του εμπύρετου με προσδιορισμό γενικής αίματος, pH, βιοχημικού ελέγχου, ανοσοσφαιρινών, αντιπυρηνικών αντισωμάτων (ANA)/ anti-ds DNA και καλλιέργεια ούρων/αίματος/πύου. Προσδιορίσαμε τα ΝΚΤ με κυτταρομετρία ροής με μονοκλωνικά PE CY 5 anti -CD3, FITC anti- CD4, PE anti-NKT-Cell Receptor , τις ενδοκυττάριες κυταροκίνες με Alexa Fluor anti-IFN-γ/ APC anti- IL-4. Μελετήθηκαν: CD3+IL-4+NKT+ , CD4+IL-4+NKT+, CD3+IFNγ+NKT+, CD4+IFNγ+ΝΚΤ+,CD3+NKT+, CD4+NKT+ ,CD3+IL4+, CD4+IL-4+, CD3+IFNγ+, CD4+IFNγ+ . Η βαρύτητα νόσου ταξινομήθηκε με το σύστημα APACHE IΙ.Αποτελέσματα: Ο αριθμός των ΝΚΤ και οι ενδοκυττάρια παραγόμενες IFNγ/IL4 μειώνονται από την ημέρα 3 στην 6 χωρίς διαφορά ανάμεσα στις δύο ομάδες. Τα CD4+/CD3+ παράγουν μεικτού τύπου απάντηση (Th1/Th2), έχουν στατιστικά σημαντική διαφορά στην ομάδα ΣΔ2 την 3η ημέρα, και παρόμοια αύξηση στατιστικά σημαντική εντός των ομάδων από την ημέρα 3 στην 6. Στις μετρήσεις ANA , anti-ds DNA , ανοσοσφαιρινών δεν διαπιστώνεται διαφορά μεταξύ των ομάδων.