Εξυγίανση ελληνικών οινοποιήσιμων ποικιλιών αμπέλου από ιούς με μεθόδους βιοτεχνολογίας, κυτταρολογική μελέτη και ανάπτυξη πρωτοκόλλου μικροπολλαπλασιασμού τους

Abstract

In the present thesis the eradication of viruses GRSPaV and GLRaV-I from the grapevine varieties Agiorgitiko, Malagouzia and Xinomavro (V. vinifera L.) was investigated. Virus detection was carried out by ELISA and nested RT PCR. The elimination methods used were: a) the combination of thermotherapy with meristem and shoot tip culture, and b) chemotherapy by Tiazofurin, Ribavirin and Mycophenolic acid. Virus elimination was achieved by all methods tested for Agiorgitiko and Malagouzia, but not for Xinomavro. Furthermore, a complete micropropagation protocol was developed for all cultivars, since different varieties respond differently in the stages of the method. From comparative anatomical and cytological study of infected and virus tree plants of Agiorgitiko, a difference in volume density of chloroplasts and in the number of the cells of tannins was observed. Furthermore, in infected and virus-free plants by chemotherapy, plastoglobuli were observed but not in virus-free plants by thermotherapy. The proposed eradication method for grapevine plants is the combination of thermotherapy with shoot tip culture.

Στην παρούσα διατριβή μελετήθηκε η εξυγίανση των ποικιλιών αμπέλου, του Αγιωργίτικο, Μαλαγουζιά και Ξινόμαυρο (V. Vinifera L.), από τους ιούς GRSPaV και GLRaV. Οι ιολογικοί έλεγχοι έγιναν με τη μέθοδο ELISA και ένθετης RT PCR. Οι μέθοδοι εξυγίανσης που εφαρμόστηκαν ήταν: α) ο συνδυασμός θερμοθεραπείας και καλλιέργειας μεριστωμάτων και βλαστικών κορυφών, και β) η χημειοθεραπεία με τα Tiazofurin, Ribavirin και Mycophenolic acid. Η εξυγίανση επιτεύχθηκε για τις ποικιλίες Αγιωργίτικο και Μαλαγουζιά με όλες τις μεθόδους που εφαρμόστηκαν. Επίσης αναπτύχθηκε ολοκληρωμένο πρωτόκολλο μικροπολλαπλασιασμού και για τις τρεις ποικιλίες, δεδομένου ότι διαφορετικές ποικιλίες αντιδρούν διαφορετικά στα στάδια της μεθόδου. Από τη συγκριτική, ανατομική και κυτταρολογική μελέτη εξυγιασμένων και προσβεβλημένων φυτών Αγιωργίτικου, προέκυψε διαφορά στην πυκνότητα όγκου των χλωροπλαστών και στον αριθμό των κυττάρων ταννίνης. Επίσης, στα προσβεβλημένα και στα εξυγιασμένα μέσω χημειοθεραπείας φυτά παρατηρήθηκαν πλαστοσφαιρίδια, σχηματισμού που δεν υπήρχαν στα εξυγιασμένα φυτά μέσω θερμοθεραπείας και ιστοκαλλιέργειας. Η προτεινόμενη μεθοδολογία εξυγίανσης για φυτά της αμπέλου είναι ο συνδυασμός θερμοθεραπείας και καλλιέργειας βλαστικών κορυφών.