ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ ΤΟΥ ΥΑΛΩΔΟΥΣ ΧΟΝΔΡΟΥ

Abstract

ΑΠΟΔΕΙΚΝΥΕΤΑΙ Η ΣΥΝΥΠΑΡΞΗ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ, ΣΕ ΑΝΕΝΕΡΓΟ ΚΑΙ ΕΝΕΡΓΟ ΜΟΡΦΗ, ΜΕ ΤΟΝ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟ ΑΝΑΣΤΟΛΕΑ ΤΗΣ ΣΕ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΑ ΥΓΙΟΥΣ ΥΑΛΩΔΟΥΣ ΧΟΝΔΡΟΥ. ΑΠΟ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ ΣΕ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΑ ΑΠΟ ΤΡΟΠΙΔΑ ΚΟΤΟΠΟΥΛΩΝ ΚΑΙ ΠΕΡΙΣΤΕΡΙΩΝ ΚΑΙ ΑΠΟΧΟΝΔΡΟ ΧΟΝΔΡΙΧΘΥΩΝ, ΒΑΤΡΑΧΩΝ ΚΑΙ ΑΠΟ ΜΥΤΗ ΜΟΣΧΑΡΙΟΥ ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΟΤΙ Η ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΜΕΙΩΝΕΤΑΙ ΜΕ ΑΥΞΗΣΗ ΤΗΣ ΗΛΙΚΙΑΣ ΤΟΥ ΠΕΙΡΑΜΑΤΟΖΩΟΥ, ΕΝΩ ΑΝΤΙΘΕΤΑ ΑΥΞΑΝΕΤΑΙ ΤΟ ΠΟΣΟΣΤΟ ΤΗΣ ΑΝΕΝΕΡΓΟΥ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ. Η ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ ΠΡΟΕΚΥΨΕ ΟΤΙ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΕ ΔΥΟ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΑ ΕΝΖΥΜΙΚΑ ΜΟΡΙΑ, ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗ 1 ΚΑΙ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗ 2. Ο ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΔΥΟ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΩΝ ΕΓΙΝΕ ΜΕ ΣΤΗΛΗ ΙΟΝΙΚΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ DE 52. Ο ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΕΓΙΝΕ ΜΕ SDS ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΟΛΥΑΚΡΥΛΑΜΙΔΙΟΥ ΚΑΙ ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ ΤΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ 1 ΕΙΝΑΙ68.000 ΚΑΙ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ 2 ΕΙΝΑΙ 43.000. ΤΑ ΔΥΟ ΕΝΖΥΜΑ ΔΙΑΣΠΟΥΝ ΤΟ ΚΟΛΛΑΓΟΝΟ ΙΙ ΣΕ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΠΡΟΙΟΝΤΑ TC^A ΚΑΙ TC^B ΣΕ 25 ΒΑΘΜΟΥΣ C ΚΑΙ PH 7.6. ΗΤΡΥΨΙΝΗ ΚΑΙ Ο ΑΜΙΝΟΦΑΙΝΥΛΟΞΙΚΟΣ ΥΔΡΑΡΓΥΡΟΣ ΑΥΞΑΝΟΥΝ ΤΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΗΣ 1. Η ΑΝΑΣΤΟΛΗ ΚΑΙ ΤΩΝ ΔΥΟ ΕΝΖΥΜΩΝ ΑΠΟ EGTA ΚΑΙ 1,10 - ΦΑΙΝΑΘΡΟΛΙΝΗ ΟΔΗΓΕΙ ΣΤΟ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ΟΤΙ ΟΙ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΕΣ ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΤΙΣ ΜΕΤΑΛΛΟΠΡΩΤΕΑΣΕΣ. ΑΠΟ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΑΝΑΣΤΟΛΕΩΝ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΑΣΩΝ (Ν - ΑΙΘΥΛΜΑΛΕΙΝΙΔΙΟ, ΙΩΔΟΞΙΚΟ ΟΞΥ, ΦΑΙΝΥΛΜΕΘΥΛΣΟΥΛΦΟΝΥΛΦΘΟΡΙΔΙΟ ΔΙΘΕΙΟΘΡΕΙΤΟΛΗ, ΑΝΑΣΤΟΛΕΑΣ ΤΗΣ ΤΡΥΨΙΝΗΣ ΑΠΟ ΣΟΓΙΑ ΚΑΙΠΕΨΑΤΙΝΗ) ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ ΟΙ ΔΥΟ ΚΟΛΛΑΓΕΝΑΣΕΣ ΔΕΝ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΩΣΤΕΙΝΗ, ΑΣΠΑΡΑΓΙΝΙΚΟ Η ΣΕΡΙΝΗ ΣΤΟ ΕΝΕΡΓΟ ΤΟΥΣ ΚΕΝΤΡΟ.

COLLAGENASE IN LATENT AND ACTIVE FORM AND COLLAGENASE INHIBITOR WAS FOUND TO COEXIST IN HEALTHY HYALINE CARTILAGE,. CHICK AND PIGEON STERNUM, CHONDRICTHYS, RANA RIDIBUNDA AND BOVINE NASAL CARTILAGE EXTRACTS WERE USED TO STUDY THE COLLAGENASE ACTIVITY. THE ENZYME ACTIVITY DECREASED AS THE CARTILAGE AGE INCREASED; ON THE OTHER HAND THE LEVEL OF THE ENZYME LATENT FORM INCREASED. TWO PEAKS OF COLLAGENASE ACTIVITY WERE REVEALED ON DE 52 ION EXCHANGE COLUMN, COLLAGENASE 1 AND COLLAGENASE 2. THE APPARENT MOL. WT. OF COLLAGENASE 1 AND 2 AS DETERMINED BY SDS - PAGE WERE 68 AND 43 KDA RESPECTIVELY. BOTH ENZYMES DEGRADE NATIVE COLLAGEN TYPE II INTO TWO CHARACTERISTIC PRODUCTS, TC^A (3/4) AND TC^B (1/4), AT 25 C DEGREES AND PH 7.6. TRYPSIN AND AMINOPHENYLMERCURIC ACETATE WERE CAPABLE OF INCREASING THE COLLAGENASE 1 ACTIVITY. THE TWO ENZYMES CAN BE CHARACTERIZED AS METALLOPROTEINASES SINCE THEY WERE INHIBITED BY EGTA AND 1,10 - PHENANTHROLINE. THE USE OF PROTEINASE INHIBITORS (N - ETHYMALEIMIDE, IODOACETICACID, PHENYLMETHYLSULPHONYL FLUORIDE, SOYBEAN TRYPSIN INHIBITOR, PEPSTATIN, DITHIOTHEEITOL) SHOWED THAT THE ENZYMES DO NOT CONTAIN SERINE, CYSTEINE OR ASPARFIC ACID IN THEIR ACTIVE SITES.