ΤΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΝΕΥΡΩΝΙΚΟ ΜΟΡΙΟ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ ΤΑΧ-1: ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣΚΑΙ ΤΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΟΥ

Abstract

Η ΠΑΡΟΥΣΑ ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΑΣΧΟΛΕΙΤΑΙ ΜΕ ΤΗΝ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΝΕΥΡΩΝΙΚΟΥ ΜΟΡΙΟΥ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ ΤΑΧ-1, ΚΑΘΩΣ ΕΠΙΣΗΣ ΜΕ ΤΗΝ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΗΣΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΤΑΧ-1 ΚΑΙ ΤΗΣ ΔΟΜΙΚΗΣ ΟΡΓΑΝΩΣΗΣ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ. ΤΟ ΤΑΧ-1 CDNA ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΑΠΟ ΜΙΑ ΛZAPII CDNA ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ ΑΠΟ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑ, ΚΑΙ Η ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΤΑΧ-1 ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ 91% ΚΑΙ 75% ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΤΙΣ ΟΜΟΛΟΓΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ TAG-1 ΚΑΙ AXONIN-1, ΤΟΥ ΑΡΟΥΡΑΙΟΥ ΚΑΙ ΚΟΤΟΠΟΥΛΟΥ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΔΙΑΤΗΡΕΙ ΟΛΑ ΤΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΗΣ TAG-1/F3 ΥΠΟΟΜΑΔΑΣ ΤΩΝ ΝΕΥΡΩΝΙΚΩΝ ΜΟΡΙΩΝ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ ΠΟΥ ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΤΗΝ IG ΥΠΕΡΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑ, ΜΕ ΕΞΗ (6) ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΠΑΡΟΜΟΙΕΣ ΠΡΟΣ ΤΗΝ C2 ΠΕΡΙΟΧΗ ΤΩΝ ΑΝΟΣΟΣΦΑΙΡΙΝΩΝ (IGC2-TYPE DOMAINS), ΤΕΣΣΕΡΙΣ (4) ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΠΑΡΟΜΟΙΕΣ ΠΡΟΣ ΤΗΝ ΤΡΙΤΗ ΕΠΑΝΑΛΗΨΗ ΤΗΣ ΦΙΜΠΡΟΝΕΚΤΙΝΗΣ (FNIII-TYPE REPEATS) ΚΑΙ ΤΟΝ GPI ΔΕΣΜΟ ΣΤΟ ΚΑΡΒΟΞΥΤΕΛΙΚΟ ΑΚΡΟ ΠΟΥ ΔΕΝΕΙ ΤΗΝ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΣΤΗΝ ΕΞΩΤΕΡΙΚΗ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ. Η ΔΕΥΤΕΡΗ IGC2-ΤΥΠΟΥ ΠΕΡΙΟΧΗ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΤΗΝ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗ ΑΝΑΜΕΣΑΚΑΙ ΣΤΙΣ ΤΡΕΙΣ ΟΜΟΛΟΓΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ, ΕΝΩ ΜΟΝΟ ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΤΩΝ ΘΗΛΑΣΤΙΚΩΝ (ΤΑΧ-1 ΚΑΙ TAG-1), ΔΙΑΘΕΤΟΥΝ ΣΤΗΝ ΔΕΥΤΕΡΗ FNIII-ΤΥΠΟΥ ΠΕΡΙΟΧΗ ΤΟ ΤΡΙΠΕΠΤΙΔΙΟ RGD,ΜΟΤΙΒΟ ΓΝΩΣΤΟ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΑΓΝΩΡΙΣΗ ΤΗΣ ΦΙΜΠΡΟΝΕΚΤΙΝΗΣ ΑΠΟ ΙΝΤΕΓΚΡΙΝΕΣ. ΜΕΤΑ ΤΗΝ ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΤΑΧ-1 CDNA ΣΤΗΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΣΕΙΡΑ ΤΗΣ D. MELANOGASTER SCHNEIDER-2(S2), ΠΑΡΑΤΗΡΗΘΗΚΕ ΑΥΞΗΣΗ ΤΗΣ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ ΚΑΙ ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ ΜΕΤΑΞΥ ΤΩΝ ΔΙΑΜΟΛΥΣΜΕΝΩΝ S2 ΚΥΤΤΑΡΩΝ. (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

THE PRESENT STUDY DESCRIBES THE CLONING AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF THE HUMAN NEURAL CELL ADHESION MOLECULE TAX-1, AS THE CHROMOSOMAL ORGANIZATION AND REGULATION OF THE TAX-1 GENE. SCREENING OF A HUMAN CEREBELLUM CDNA LIBRARY, LED TOTHE ISOLATION OF THE TAX-1 CDNA MOLECULE, THAT SHOWED 91% AND 75% SIMILARITY AT THE AMINO ACID LEVEL WITH ITS HOMOLOGUES TAG-1/F3 SUBGROUP OF THE IG SUPERFAMILY OF NEURONAL CELL ADHESION MOLECULES, THAT IS: SIX (6) IMMUNOGLOBULIN LIKE DOMAINS OF THE C2 TYPE (IGC2) WHICH ARE FOLLOWED BY FOUR (4) FIBRONECTIN TYPE III REPEATS (FNIII) AND A C-TERMINAL HYDROPHOBIC REGION, CHARACTERISTIC TO PROTEINS THAT ARE LINKED TO THE CELL MEMBRANE VIA A GPI LINKAGE. THE SECOND IGC2-TYPE DOMAIN PRESENTS THE HIGHEST SIMILARITY AMONG THE THREE HOMOLOGOUS PROTEINS, WHEREAS ONLY THE TWO MAMMALIAN PROTEINS (TAG-1 AND TAX-1) SHARE IN THE SECOND FNIII-TYPE REPEAT THE RGD TRIPEPTIDE, A MOTIF KNOWN TO MEDIATE RECOGNITION OF FIBRONECTION BY INTEGRINS. STABLE EXPRESSION OF THE TAX-1 MOLECULE IN THE NON-ADHERENT CELL LINE OF D. MELANOGASTER SCHNEIDER-2 (S2), SHOWED ADRAMATIC INCREASE OF CELL ADHESION IN THE TRANSFECTED S2 CELLS. IN ANALOGOUS EXPERIMENTS USING DELETION CONSTRUCTS EXPRESSING EITHER THE IGC2-TYPE DOMAINS OR THE FNIII-TYPE REPEATS OF THE TAX-1 PROTEIN, WE HAVE SHOWN THAT THE FNIII REPEATS ALONE, ARE BOTH SUFFICIENT AND NECESSARY FOR MEDIATING THE HOMOPHILIC ADHESIVE PROPERTIES OF TAX-1 PROTEIN. (ABSTRACT TRUNCATED)