Ιστικός και ποσοτικός προσδιορισμός των TLR's στο έντερο και στο ήπαρ σε σηπτικά μοντέλα μυών

Abstract

Objective: To investigate the expression of toll-like receptors (TLRs) in the liver of septic mouse model.Materials and methods: For this study seventy-two C57BL/6J mice were utilized. Sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP) in the mice of the three septic (S) groups (euthanized at 24 hours, 48 hours and 72 hours). Sham (laparotomy) operated mice constituted the control (C) groups (euthanized at 24, 48 and 72 hours). Blood samples were drawn and liver tissues were extracted and examined histologically. The expression of TLRs 2, 3, 4 and 7 was assessed via immunohistochemistry (IHC) and qrt-PCR (quantitative-Polymerase Chain Reaction).Results: Liver function tests were elevated in all S-groups in contrast to their time-equivalent control groups (S24 versus C24, S48 versus C48 and S72 versus C72) (p < 0.05). Liver histology displayed progressive deterioration in the septic groups. IHC and qrt-PCR both showed an increased expression of all TLRs in the septic mice in comparison to their analogous control ones (p < 0.05). Analysis of livers and intestines of the septic animals proved that all TLRs were significantly expressed in higher levels in the intestinal tissues at 24h and 48h (p < 0.05) except for TLR 3 in S48 (p > 0.05); whereas at 72 hours only TLR 4 levels were significantly elevated in the intestine (p < 0.05).Conclusion: TLRs seem to be expressed in significant levels in the livers of septic rodents, indicating that they have a possible role in the pathophysiology of liver damage during in septic conditions.

Σκοπός: Σκοπός της μελέτης είναι να διερευνήσει την έκφραση των υποδοχέων TLRs στο ήπαρ σε σηπτικά μοντέλων μυών.Υλικά και Μέθοδοι: Για αυτή τη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν 72 αρσενικοί μύες, γενετικού υποστρώματος C57BL/6J. Η ανάπτυξη της σήψης στα ζώα και συγκεκριμένα στην ομάδα S, πραγματοποιήθηκε μέσω της διαδικασίας απολίνωσης και παρακέντηση/τρώση δια βελόνης του τυφλού (CLP) σε τρείς σηπτικές (S) ομάδες ζώων με βάση το χρόνο ευθανασίας (24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες). Παρόμοια διαδικασία ακολουθήθηκε και για τις ομάδες ελέγχου C (24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες), ώστε οι συνθήκες σήψης να παραμένουν παρεμφερείς στις δύο ομάδες, με τη μόνη διαφορά ότι το τυφλό δεν απολινώθηκε. Πραγματοποιήθηκε αιμοληψία και μετά την ευθανασία αφαιρέθηκαν ηπατικοί ιστοί, οι οποίοι εξετάσθηκαν ιστολογικά. Η έκφραση των TLRs 2, 3, 4 και 7 εξετάστηκε μέσω ανοσοϊστοχημείας (IHC) και αντίστροφης αλυσιδωτής αντίδρασης μεταγραφής της πολυμεράσης qrt-PCR (quantitative-Polymerase Chain Reaction).Αποτελέσματα: Από τις βιοχημικές και ανοσολογικές αναλύσεις, παρατηρήθηκαν υψηλότερες τιμές, σε όλους τους δείκτες, της ομάδας σήψης (S24, S48, S72) σε σχέση με την αντίστοιχη ομάδα ελέγχου (C24, C48, C72), (p<0.05). Ενώ η ιστολογική εξέταση των ιστικών δειγμάτων του ήπατος αποκάλυψε μια προοδευτική αλλοίωση της ηπατικής ιστολογίας στις σηπτικές ομάδες. Τέλος, η IHC και qrt-PCR ανάλυση έδειξαν μια αύξηση της έκφρασης των TLRs στις σηπτικές ομάδες μυών σε σχέση με τις αντίστοιχες ομάδες ελέγχου (p<0.05). Η ηπατική και εντερική ανάλυση στη σηπτική ομάδα μυών έδειξε ότι, η έκφραση των TLRs ήταν υψηλότερη στους εντερικούς ιστούς των σηπτικών ομάδων των 24h και 48h (p < 0.05), εκτός του TLR 3 των 48h (p > 0.05). Αντίθετα για την ομάδα των 72h μόνο η έκφραση του TLR 4 ήταν υψηλότερη στους εντερικούς ιστούς, σε σχέση με τους ηπατικούς (p < 0.05).Συμπεράσματα: Τα συμπεράσματα που προκύπτουν απο τη συγκεκριμένη έρευνα δείχνουν πως η έκφραση των κυτταρικών υποδοχέων TLRs στο ήπαρ παρουσιάζει σημαντική αύξηση σε σηπτικά μοντέλα μυών, γεγονός που υποδηλώνει ότι εμπλέκονται στην παθογένεια της ηπατικής ανεπάρκειας που εκδηλώνεται στα πλαίσια σήψης.