ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΦΥΣΙΚΩΝ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ ΤΟΥ ΣΤΕΛΕΧΟΥΣ ATCC 10988 ΤΟΥ ΑΙΘΑΝΟΛΟΠΑΡΑΓΩΓΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΟΥ ZYMOMONAS MOBILIS

Abstract

FIVE NATIVE PLASMIDS OF Z. MOBILIS STRAIN ATCC 10988 HAVE BEEN ISOLATED, NAMELYPZMO2, PZMO3, PZMO5, PZMO6 WITH SIZE 1,70, 1,85, 2,70, 16,7, AND 31,8 KB RESPECTIVELY. RESTRICTION MAPPING (PARTIAL) OF ALL THESE PLASMIDS WAS FOLLOWED AND THEIR HOMOLOGY LEVELS WERE DETERMINED. SIMILARLY, THEIR HOMOLOGY AGAINST TOTAL GENOMIC DNA AND PLASMID DNA OF Z. MOBILIS STRAINS ATCC 10988, NCIB 11163 AND CP4 WAS EXAMINED. PLASMID PZMO3 WAS NONHOMOLOGUS EITHER TO CHROMOSOMAL DNA OR ANYOF THE OTHER PLASMIDS THESE STRAINS HARBOURED. A SERIES OF RECOMBINANT PLASMIDS WERE ESTABLISHED AND WERE USED TO CONFINE THE REGION OF PZMO3 WHICH CONTAINS SEQUENCES INVOLVED IN ITS STABILITY CONTROL. ONE OF THE SUBCLONED FRAGMENTS EXHIBITED STRONG INCOMPATIBILITY BETWEEN THE RESPECTIVE RECOMBINANT PLASMID AND NATIVE PZMO3. THIS HAS RESULTED INTO THE ESTABLISHMENT OF A VEGETATIVE CURING SYSTEM AGAINST THE NATIVE PLASMID (PZMO3), A METHOD WHICH PROVIDES, FOR THE FIRST TIME, AN ALTERNATIVE TOOL FOR STRAIN CONSTRUCTION VIA RECOMBINANT DNA IN Z. MOBILIS.

ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ 5 ΦΥΣΙΚΑ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑ ΤΟΥ ΣΤΕΛΕΧΟΥΣ ATCC 10988 ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΟΥ Z. MOBILIS: ΤΑ ΡΖΜΟ1, ΡΖΜΟ2, ΡΖΜΟ3, ΡΖΜΟ5 ΚΑΙ ΡΖΜΟ6 ΜΕ ΜΕΓΕΘΟΣ 1,70, 1,85, 2,70, 16,7 ΚΑΙ 31,8 ΚΒ, ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΘΗΚΑΝ ΜΕΡΙΚΟΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΟΙ ΧΑΡΤΕΣ ΤΩΝ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ ΑΥΤΩΝ ΚΑΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ Ο ΒΑΘΜΟΣ ΟΜΟΛΟΓΙΑΣ ΤΟΥΣ. ΑΚΟΛΟΥΘΩΣ, ΕΞΕΤΑΣΘΗΚΕ Ο ΒΑΘΜΟΣ ΟΜΟΛΟΓΙΑΣ ΤΩΝ ΠΛΑΣΜΙΔΙΩΝ ΜΕ ΤΟ ΟΛΙΚΟ ΚΑΙ ΤΟ ΠΛΑΣΜΙΔΙΚΟ DNA ΤΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ ATCC 10988, NCIB11163 ΚΑΙ CP4 ΤΟΥ Z. MOBILIS. ΤΟ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟ ΡΖΜΟ3 ΔΕΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΕΟΜΟΛΟΓΙΑ ΟΥΤΕ ΜΕ ΤΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΟ DNA ΟΥΤΕ ΜΕ ΚΑΝΕΝΑ ΑΛΛΟ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟ. ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΘΗΚΑΝ ΜΙΑ ΣΕΙΡΑ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΑ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ ΤΟΥ ΡΖΜΟ3 ΠΟΥ ΠΕΡΙΕΧΕΙ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΕΣ ΥΠΕΥΘΥΝΕΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥ. ΕΝΑ ΑΠΟ ΤΑ ΥΠΟΚΛΩΝΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΤΜΗΜΑΤΑ ΠΡΟΚΑΛΟΥΣΕ ΙΣΧΥΡΗ ΑΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ ΜΕΤΑΞΥ ΤΟΥ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟΥ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΦΥΣΙΚΟΥ ΡΖΜΟ3.ΑΥΤΟ ΕΙΧΕ ΣΑΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ ΤΗΝ ΚΑΘΙΕΡΩΣΗ ΕΝΟΣ ΑΓΕΝΟΥΣ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΕΚΔΙΩΞΗΣ ΦΥΣΙΚΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ (ΡΖΜΟ3), ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΠΑΡΕΧΕΙ, ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ, ΜΙΑ ΕΝΑΛΛΑΚΤΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟ ΚΑΤΑΣΚΕΥΗΣ ΣΤΕΛΕΧΩΝ Z. MOBILIS ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΗ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΟΥ DNA.