ΣΥΣΤΗΜΑ ΠΡΩΤΕΙΝΟΣΥΝΘΕΣΗΣ ΕΛΕΥΘΕΡΟ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΑΠΟ ΣΥΚΩΤΙ ΠΟΝΤΙΚΟΥ C3HB

Abstract

A CELL FREE SYSTEM OF PROTEIN SYNTHESIS OF MOUSE LIVER WAS DEVELOPED. A MOST INTERESTING FEATURE OF THIS SYSTEM IS ITS VERY HIGH ACTIVITY WITH ENDOGENOUS MRNA. A WIDE RANGE OF PRODUCTS ARE LABELLED DURING OPERATION OF THE SYSTEM. THERE IS A LAG PERIOD IN THE LABELLING OF SMALL AND HIGH MOLECULAR WEIGHT PRODUCTS. CYCLOBEXIMIDE, WHICH INHIBITS OVERALL PROTEIN SYNTHESIS BY 80% ALMOST COMPLETELY INHIBITS SYNTHESIS OF PROTEINS APPEARING LATE. OF THE POLYAMINES TESTED SPERMIDINE WEAKLY ACTIVATES AT LOW CONCENTRATIONS AND SPERMINE IS HIGHLY INHIBITORY EVEN AT LOW CONCENTRATIONS. INCREASING CONCENTRATIONS OF SPERMIDINE INTENSIFY LABELLING OF AT LEAST TWO PROTEINS WITH M.W 14.5 AND 15.5 KD. EXOGENOUS MRNA (GLOBIN MRNA, TMV RNA) CAN BE TRANSLATED IF THE SYSTEM IS TREATED EITHER BY MICROCOCCAL NUCLEASE OR BY PREINCUBATION TO EXHAUST ENDOGENOUS MRNA. IN THESECOND CASE THE PREINCUBATED SYSTEM HAS TO BE SUPPLIED WITH ADDITIONAL INITIATION FACTORS. AN INHIBITORY AGENT IS EXTRACTED WITH THE INITIATION FACTORS. THE INHIBITOR WAS PURIFIED WITH DEAE-BIOGEL A, SEPHADEX C50 CONCLUDED THAT THE RESPONSIBLE AGENT IS MOST LIKELY TRACES OF AMINOACIDS THAT DILUTE THE LABELLEDAMINOACID.

ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΕΝΑ ΣΥΣΤΗΜΑ ΠΡΩΤΕΙΝΟΣΥΝΘΕΣΗΣ ΕΛΕΥΘΕΡΟ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΑΠΟ ΣΥΚΩΤΙ ΠΟΝΤΙΚΩΝC3HB, ΜΕ ΚΥΡΙΟ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΟ ΤΗΝ ΥΨΗΛΗ ΕΝΔΟΓΕΝΗ ΔΡΑΣΗ. ΑΠΟ ΑΥΤΟΡΑΔΙΟΓΡΑΦΙΑ ΠΡΟΚΥΠΤΕΙ ΟΤΙ, ΜΕ ΤΟ ΕΝΔΟΓΕΝΕΣ MRNA, ΣΥΝΘΕΤΕΤΑΙ ΕΝΑΣ ΜΕΓΑΛΟΣ ΑΡΙΘΜΟΣ ΠΡΟΙΟΝΤΩΝ ΜΕ Μ.Β. ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΑ ΤΩΝ 100.000 ΕΩΣ 10.000. ΟΡΙΣΜΕΝΑ ΑΠΟ ΑΥΤΑ ΕΜΦΑΝΙΖΟΝΑΙ ΠΡΩΙΜΑ ΣΤΗ ΚΑΜΠΥΛΗ ΧΡΟΝΟΥ ΕΝΩ ΑΛΛΩΝ Η ΕΜΦΑΝΙΣΗ ΚΑΘΥΣΤΕΡΕΙ. ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΚΥΚΛΟΕΞΙΜΙΔΙΟΥ ΔΙΝΕΙ 80% ΑΝΑΣΤΟΛΗ. ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΠΟΥ ΑΝΑΣΤΕΛΛΟΝΤΑΙ ΚΥΡΙΩΣ ΕΙΝΑΙ ΕΚΕΙΝΕΣ ΠΟΥ ΚΑΘΥΣΤΕΡΟΥΝ ΣΤΗΝ ΚΑΜΠΥΛΗ ΧΡΟΝΟΥ. ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΣΠΕΡΜΙΔΙΝΗΣ ΣΕ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ 100-500 ΜΜ ΠΡΟΚΑΛΕΙ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΕΝΩ ΣΕ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΕΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ ΠΡΟΚΑΛΕΙ ΑΝΑΣΤΟΛΗ. ΗΣΠΕΡΜΙΝΗ ΠΡΟΚΑΛΕΙ ΜΕΓΑΛΗ ΑΝΑΣΤΟΛΗ. ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΤΩΝ ΑΝΑΣΤΑΛΤΙΚΩΝ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΩΝ ΤΗΣ ΣΠΕΡΜΙΔΙΝΗΣ ΔΥΟ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΜΕ Μ.Β 14,5 ΚΑΙ 15,5 KD ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΝΑ ΙΣΧΥΡΟΠΟΙΟΥΝΤΑΙ. ΤΟ ΣΥΣΤΗΜΑ ΕΧΕΙ ΤΗΝ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΝΑ ΜΕΤΑΦΡΑΖΕΙ ΕΞΩΓΕΝΗ MRNA (MRNA ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ, TMV RNA) ΕΙΤΕ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΚΑΤΕΡΓΑΣΙΑ ΜΕ ΜΙΚΡΟΚΟΚΚΙΚΗ ΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΕΙΤΕ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΡΟΕΠΩΑΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΞΑΝΤΛΗΣΗ ΤΟΥ ΕΝΔΟΓΕΝΟΥΣ MRNA. ΣΤΗ ΔΕΥΤΕΡΗ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΗ ΕΙΝΑΙ Η ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ ΕΝΑΡΞΗΣ. ΜΑΖΙ ΜΕ ΤΟΥΣ ΠΑΡΑΓΟΝΤΕΣ ΕΝΑΡΞΗΣ ΕΚΧΥΛΙΖΕΤΑΙ ΚΑΙ ΕΝΑΣ ΑΝΑΣΤΟΛΕΑΣ, ΠΟΥ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟ ΣΕ DEAE-BIOGEL A, SEPHADEX G-50, ΚΑΙ BIOGEL P2 ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΟΤΙ ΠΡΟΚΕΙΤΑΙ ΓΙΑ ΜΙΚΡΑ ΠΟΣΑ ΑΜΙΝΟΞΕΩΝ ΠΟΥ ΑΠΛΩΣ ΑΡΑΙΩΝΟΥΝ ΤΟ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟ ΡΑΔΙΕΝΕΡΓΟ ΑΜΙΝΟΞΥ.